一種具有強特異性的半胱氨酸熒光分子探針及其合成與應用、以及含有其的試劑盒，所述分子探針具有式Ⅰ所示的結構式：所示熒光分子探針合成路線簡單，成本低廉，操作簡便，對半胱氨酸的檢測具有優異的特異性，且具有快速的響應速度，在對半胱氨酸的快速檢測方面具有較高的應用價值。

技術領域

本發明涉及一種且具有強特異性的半胱氨酸熒光分子探針及其合成與應用、以及含有其的試劑盒，屬于有機小分子熒光探針技術領域。

背景技術

半胱氨酸(cysteine，Cys)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)等生物硫醇在生物系統中發揮著重要作用，其水平與癌癥、代謝疾病、精神退行性疾病等疾病密切相關。其中，半胱氨酸被認為是蛋白質形成、抗氧化劑生成、金屬離子結合的必需氨基酸。因此，其檢測具有重要的聲明科學和醫學價值。目前，已經開發了幾種用于檢測生物條件下半胱氨酸的分析方法，其中，基于熒光的分子傳感系統因其操作簡單和生物相容性高而備受關注?；谄鋷€基的親核性和還原性，已有了多種半胱氨酸反應型熒光探針被報道，然而，它們大多容易受到其他生物硫醇的干擾。因此，開發強特異性、高靈敏度的半胱氨酸熒光分子探針具有重要的意義。

發明內容

本發明針對當前存在的問題，提出了一種具有強特異性的半胱氨酸熒光分子探針及其合成與應用、以及含有其的試劑盒，能夠快速準確地檢測出半胱氨酸。

本發明為解決上述問題所采用的技術手段為：一種具有強特異性的半胱氨酸熒光分子探針，所述分子探針具有式Ⅰ所示的結構式：

一種具有強特異性的半胱氨酸熒光分子探針的合成，包括以下步驟：

(1)將化合物TPC溶解于二氯甲烷，加入乙二酰氯和DMF，反應結束后濃縮干燥；然后再溶解于二氯甲烷，加入苯酚、4-二甲氨基吡啶和三乙胺至反應結束，用飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應，萃取后干燥濃縮，最后層析純化，得式Ⅱ所示中間物：

其中乙二酰氯和DMF的加入方式為0-5℃攪拌加入，在室溫下繼續攪拌至反應結束后減壓濃縮、然后真空干燥，且1mmol TPC優選加入5-10mL二氯甲烷、兩滴即0.1mL DMF，加入的乙二酰氯與TPC量的比優選為1.2:1；反應結束且干燥后再次溶解時1mmol TPC對應的產物中加入的二氯甲烷優選為2-3mL，苯酚優選為1-1.2mmol，4-二甲氨基吡啶優選為0.1-0.5mmol，三乙胺優選為3-4mmol，萃取時先用DCM或乙酸乙酯萃取，再用飽和氯化鈉溶液萃取有機層；層析純化采用硅膠柱層析純化；

(2)式Ⅱ中間物與Lawesson試劑、對二甲苯反應至結束，濃縮后層析純化得到式Ⅰ所示目標分子探針：

其中反應時在140℃惰性氣體保護下攪拌反應至結束，惰性氣體優選為氬氣；濃縮方式采用減壓濃縮，層析純化采用柱層析純化；1mmol式Ⅱ化合物中優選加入1.4-1.5mmolLawesson試劑，1.5-2mL對二甲苯。

一種具有強特異性的半胱氨酸熒光分子探針在半胱氨酸檢測試劑盒中的應用。

一種半胱氨酸檢測試劑盒，所述試劑盒包括結構式為式Ⅰ的半胱氨酸熒光分子探針，以及半胱氨酸檢測組合物。

進一步地，半胱氨酸檢測組合物包括半胱氨酸標準品和溶劑。

進一步地，溶劑為PBS緩沖液和乙腈的混合溶液。

進一步地，溶劑中PBS緩沖溶液(0.01mol/L，pH＝7.4)和乙腈的體積比為7：3。

本發明所述的半胱氨酸檢測試劑盒的檢測原理為：