[發明專利]堿性蛋白酶基因、雜合啟動子、重組表達載體、重組表達工程菌、堿性蛋白酶及方法和應用有效
| 申請號： | 202110952632.8 | 申請日： | 2021-08-19 |
| 公開（公告）號： | CN113699138B | 公開（公告）日： | 2023-10-24 |
| 發明（設計）人： | 王建榮;趙良忠;陳浩;李明;周小虎;周曉潔;黃展銳 | 申請（專利權）人： | 邵陽學院 |
| 主分類號： | C12N9/54 | 分類號： | C12N9/54;C12N15/57;C12N15/113;C12N15/75;C12N15/90;C12N15/67;C12N15/64;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 長沙智嶸專利代理事務所(普通合伙) 43211 | 代理人： | 李婷婷 |
| 地址： | 422000 湖南省邵陽市*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 堿性 蛋白酶 基因 啟動子 重組 表達 載體 工程 方法 應用 | ||
1.一種堿性蛋白酶基因bcp，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一種堿性蛋白酶BCP，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一種用于在枯草芽孢桿菌中高效表達堿性蛋白酶的雜合啟動子，其特征在于，所述雜合啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。
4.一種重組表達載體，其特征在于，包括權利要求1所述的堿性蛋白酶基因bcp、權利要求3所述的雜合啟動子和信號肽，所述信號肽的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示。
5.一種重組表達工程菌，其特征在于，包括權利要求4所述的重組表達載體。
6.一種根據權利要求2所述的堿性蛋白酶BCP的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
提供堿性蛋白酶基因bcp、表達載體和表達菌株；
對堿性蛋白酶基因bcp進行擴增，擴增產物與表達載體進行連接，獲得重組表達載體；
將重組表達載體基因整合到表達菌株，獲得重組表達工程菌；
對所述重組表達工程菌進行培養，獲得堿性蛋白酶BCP；
其中，所述堿性蛋白酶基因bcp的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
7.根據權利要求6所述的堿性蛋白酶BCP的制備方法，其特征在于，
所述表達載體包括載體pHY、雜合啟動子和信號肽；和/或
所述表達菌株為枯草芽孢桿菌RIK1285。
8.根據權利要求6所述的堿性蛋白酶BCP的制備方法，其特征在于，
所述重組表達載體基因整合到枯草芽孢桿菌RIK1285的中溫淀粉酶基因位點。
9.根據權利要求6所述的堿性蛋白酶BCP的制備方法，其特征在于，
所述堿性蛋白酶基因bcp進行擴增的過程中，用于擴增的引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQID NO:21所示。
10.一種根據權利要求2所述的堿性蛋白酶BCP在水解蛋白質中的應用，其特征在于，
堿性蛋白酶BCP的反應溫度為20℃～70℃；
堿性蛋白酶BCP的反應pH值為7～11。
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