本申請公開了一種測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，屬于生物技術領域。該方法包括：1)取擬南芥種子，消毒，在1/2MS培養基上播種，培養至萌發第10d，將萌發的幼苗移栽到營養土中生長，直至擬南芥植株抽薹生長至10?12cm；2)當天采集主莖上開至第14階段的花朵，用鑷子夾著花柄將雄蕊上的花粉涂布在固體培養基中央，然后將花倒置在花粉涂布的邊緣位置，控溫保濕，將培養皿倒置在培養箱中暗培養；進行顯微觀察和花粉萌發率統計。本申請操作便捷，花粉用量更少，對花粉損傷更小，花粉萌發效率高，重復性好，為花粉萌發活力及育性的快速鑒定提供一種有效途徑，為研究花粉組織特異的基因功能提供一種有效手段。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種測定擬南芥離體花粉萌發率的方法。

背景技術

擬南芥(Arabidopsis thaliana)是重要的模式植物，具有個體小、生殖周期短、種子量大等特點。此外，擬南芥基因組大小適中，基因純合度高，且存在豐富的突變體材料，是開展植物功能基因組研究的理想材料。擬南芥具有典型的完全花結構，其花粉管的萌發和生長是植物有性生殖過程中的重要事件，長期以來一直是植物生殖生理與分子生物學研究的熱點領域；花粉的正常萌發和花粉管伸長也是研究植物細胞極性生長、分化以及信號轉導的重要體系。花粉離體萌發實驗是體外檢驗花粉粒成熟度和研究花粉發育相關基因功能的最直接的方法之一，不僅可以根據花粉萌發率和花粉管生長速率判斷目標基因是否參與調節該生理過程；還可以根據花粉管表型變化研究目標基因發揮作用的分子機制。

除擬南芥自身基因的功能研究外，許多尚未建立遺傳轉化體系的草本或木本植物仍然需要利用模式植物擬南芥來開展目標基因功能驗證的工作。此外，多數木本植物具有較長的童期，研究其花器官發育以及雌、雄配子體發育相關基因的功能，短期內難以在木本植物自身實現，仍然需要利用擬南芥對基因功能進行驗證。例如，在柿子(Diospyroslotus)中克隆的性別決定基因MeGI，擬南芥過量表達MeGI基因出現雄蕊缺損、變短、花粉萌發率降低等表型，表明MeGI基因能夠抑制雄蕊發育。在獼猴桃、楊樹等雌雄異株植物性別決定基因功能的研究報道中，擬南芥也都有相類似的應用。

現有的擬南芥花粉離體萌發方法存在花粉用量大、花粉萌發率低、重復性差等缺點，因此亟需建立一種高效、穩定的擬南芥花粉離體萌發方法，為花粉萌發活力及育性的快速鑒定提供一種有效途徑，為研究花粉組織特異的基因功能提供一種有效手段，也為其它非模式植物花粉離體萌發的研究提供參考。一種擬南芥花粉離體萌發培養基和培養方法(CN 103409362B)公開了一種擬南芥花粉離體萌發液體培養基，該培養基大大提高了擬南芥花粉離體萌發率和增加了花粉管長度，但由于其使用液體培養基，一方面不利于花粉離體萌發培養后續的顯微觀察、拍照和統計；另一方面其在收集花粉的過程中，需要離心，而離心過程可能會對花粉造成損傷，操作繁瑣。

發明內容

針對現有技術存在的上述缺陷，本發明所要解決的第一技術問題在于提供一種測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，具有操作便捷，花粉用量更少，對花粉損傷更小，花粉萌發效率高，重復性好等優勢。本發明所要解決的另一技術問題是提供一種采集擬南芥高萌發率花粉的方法。本發明還要解決一技術問題是提供一種高萌發率的擬南芥花粉培養方法。

為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案如下：

一種測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，包括以下步驟：

1)取擬南芥種子，消毒，在1/2MS培養基上播種，培養至萌發第10d，將萌發的幼苗移栽到營養土中生長，直至擬南芥開花；

2)當天采集主莖上完全盛開的第14階段的花朵，用鑷子夾著花柄將雄蕊上的花粉涂布在固體培養基中央，然后將花倒置在花粉涂布的邊緣位置，控溫保濕，將培養皿倒置在培養箱中暗培養。

步驟1)中，將擬南芥種子分別經4％NaClO消毒10min，70％酒精消毒30s，無菌水清洗5次。