[發明專利]一種測定擬南芥離體花粉萌發率的方法有效
| 申請號： | 202110365340.4 | 申請日： | 2021-04-02 |
| 公開（公告）號： | CN113249295B | 公開（公告）日： | 2022-05-24 |
| 發明（設計）人： | 陸靜;陳贏男;尹佟明 | 申請（專利權）人： | 南京林業大學 |
| 主分類號： | C12N5/04 | 分類號： | C12N5/04;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274 | 代理人： | 邢少華;邱興天 |
| 地址： | 210037 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 測定 擬南芥 花粉 萌發 方法 | ||
1.一種測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）取擬南芥種子，消毒，在1/2MS培養基上播種，培養至萌發，將萌發的幼苗移栽到營養土中生長，直至擬南芥開花；
2）當天采集主莖上開至第14階段的擬南芥抽薹長至10-12 cm高時的花朵，用鑷子夾著花柄將雄蕊上的花粉涂布在固體培養基的小方格，然后將花倒置在花粉涂布的邊緣位置，控溫保濕，將培養皿倒置在培養箱中暗培養；
固體培養基的配制為：取250 mL水，依次加入25 g 蔗糖、1%的硼酸2.5 mL、50 mM 的CaCl2 5 mL、50 mM的Ca(NO3)2 5 mL、50 mM的KCl 5 mL、1%的水解酪蛋白7.5 mL、1%的檸檬酸鐵銨2.5 mL、50 mg/mL的肌醇0.5 mL、50 mM 亞精胺0.5 mL，用1M的KOH調節pH值至7.5，將總體積定容至250 mL，加入瓊脂糖3 g，微波爐中火加熱熔解后倒入直徑9 cm的圓形塑料培養皿中，每皿25 mL；
3）移除培養基倒置的花朵，將小方格切下來，置于載玻片上，在光學顯微鏡下觀察，拍照記錄；
4）花粉萌發率統計。
2.根據權利要求1所述的測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，其特征在于，步驟1）中，將擬南芥種子分別經4% NaClO消毒10 min，70% 酒精消毒30 s，無菌水清洗5次。
3.根據權利要求1所述的測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，其特征在于，步驟1）中，在1/2 MS 培養基中含有3 wt.%蔗糖和0.8 wt.% 瓊脂組分。
4.根據權利要求1所述的測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，其特征在于，步驟1）中，先4℃低溫暗培養3d，然后轉移至16 h光照/8 h黑暗的22℃組培室培養一周，進行萌發培養。
5.根據權利要求1所述的測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，其特征在于，步驟1）中，營養土由體積比為3：3：3：1的營養土、有機質、蛭石和珍珠巖組成。
6.根據權利要求1所述的測定擬南芥離體花粉萌發率的方法，其特征在于，步驟2）中，在溫度26℃，濕度85%的培養箱中，將培養皿倒置暗培養6 h。
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