[發明專利]一種全細胞催化L-精氨酸合成反式-4-羥基-L-脯氨酸的方法在審
| 申請號： | 202110333266.8 | 申請日： | 2021-03-29 |
| 公開（公告）號： | CN112877318A | 公開（公告）日： | 2021-06-01 |
| 發明（設計）人： | 饒志明;龍夢飛;喬郅鈉;徐美娟;楊套偉;張顯;邵明龍 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/88 | 分類號： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/53;C12N15/55;C12N15/70;C12N1/21;C12P13/24;C12R1/19 |
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| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 催化 精氨酸 合成 反式 羥基 脯氨酸 方法 | ||
1.鳥氨酸環化脫氨酶突變體，其特征在于，所述突變體以NCBI登錄號為WP_010954390所示的氨基酸為親本，將親本的第162位和/或第205位氨基酸位氨基酸突變。
2.根據權利要求1所述突變體，其特征在于，所述突變體為(a)～(c)所示任一：
(a)將親本第162位的蘇氨酸突變為丙氨酸；
(b)將親本第205位的賴氨酸突變為甘氨酸；
(c)將親本第162位的蘇氨酸突變為丙氨酸，同時將第205位的賴氨酸突變為甘氨酸。
3.編碼權利要求1或2所述突變體的基因。
4.攜帶權利要求3所述基因的載體。
5.攜帶權利要求3所述基因的微生物細胞。
6.一種生產反式-4-羥基-L-脯氨酸的方法，其特征在于，以同時表達L-精氨酸羥化酶、L-精氨酸酶及權利要求1所述突變體的重組菌發酵生產反式-4-羥基-L-脯氨酸。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，編碼所述L-精氨酸羥化酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述L-精氨酸酶來源于Bacillus amyloliquefaciens。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，將OD600為0.6-0.8的重組菌以反應體系的5-15％量添加。
9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，在25-35℃下培養不少于20小時。
10.權利要求1或2所述突變體，或權利要求5所述微生物細胞在制備反式-4-羥基-L-脯氨酸中的應用。
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