[發明專利]一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法在審
| 申請號： | 202110309431.6 | 申請日： | 2021-03-23 |
| 公開（公告）號： | CN112980785A | 公開（公告）日： | 2021-06-18 |
| 發明（設計）人： | 王桂芳;孟東;朱毅;蹤家武 | 申請（專利權）人： | 賾譽（上海）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/078 | 分類號： | C12N5/078 |
| 代理公司： | 上海宏京知識產權代理事務所(普通合伙) 31297 | 代理人： | 劉穎 |
| 地址： | 201306 上海市浦東新區中國(上海)自由*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 活性 腫瘤 浸潤 淋巴細胞 制備 方法 | ||
1.一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一、將經過膠原酶、DNA酶和透明質酶處理后的腫瘤浸潤淋巴細胞消化液采用Hank's平衡鹽溶液洗滌，再進行密度梯度離心，得到原代腫瘤浸潤淋巴細胞；
步驟二、將原代腫瘤浸潤淋巴細胞接種至完全RPMI培養基中擴增，得到一代腫瘤浸潤淋巴細胞；
步驟三、將一代腫瘤浸潤淋巴細胞接種至轉瓶中繼續培養，即得高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞；其中，所述轉瓶中含有anti-CD3抗體、重組人IL-2蛋白和飼養細胞。
2.根據權利要求1所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述膠原酶為膠原酶IV，所述DNA酶為DNA酶type 1，所述透明質酸酶為透明質酸酶V。
3.根據權利要求2所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述腫瘤浸潤淋巴細胞消化液的制備過程包括：將腫瘤組織切碎后移入含有膠原酶IV、DNA酶type 1和透明質酸酶V的無血清培養基中，在室溫下消化處理6～24h，即得。
4.根據權利要求3所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述無血清培養基為無血清的RPMI1640培養基。
5.根據權利要求2所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述腫瘤浸潤淋巴細胞消化液的制備過程包括：將惡性腫瘤轉移性漿膜腔積液離心，向細胞富集物中加入膠原酶IV、DNA酶type 1和透明質酸酶V，室溫處理0.5～2h，即得。
6.根據權利要求5所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述惡性腫瘤轉移性漿膜腔積液為胸腔積液、腹腔積液或心包腔積液。
7.根據權利要求1～6任一項所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述原代腫瘤浸潤淋巴細胞的接種量為每孔(1.5～1.7)×106cells/ml；所述一代腫瘤浸潤淋巴細胞的接種量為(1.5～1.7)×106cells/ml。
8.根據權利要求7所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述原代腫瘤浸潤淋巴細胞的接種量為每孔1.6×106cells/ml；所述一代腫瘤浸潤淋巴細胞的接種量為1.6×106cells/ml。
9.根據權利要求1～6任一項所述的一種高活性的腫瘤浸潤淋巴細胞的制備方法，其特征在于：所述飼養細胞的制備過程為：將外周血單個核細胞經過60鈷治療機放療10Gy，即得。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于賾譽（上海）生物科技有限公司，未經賾譽（上海）生物科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.17sss.com.cn/pat/books/202110309431.6/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇：數據打印管理的方法和裝置
- 下一篇：快連式水辮
