本發(fā)明公開了基于納微復(fù)合球的病毒單顆粒分離方法，取含有納微復(fù)合球的陣列的芯片，納微復(fù)合球由納米球鑲嵌在微米球上的納米孔組成，納米球具有病毒吸附能力，微米球表面對病毒沒有特異性吸附能力，球內(nèi)部含有磁性顆粒，利用納微復(fù)合球上的納米球捕獲病毒溶液中的病毒，得到病毒?納微球復(fù)合顆粒，分離出單個病毒?納微球復(fù)合顆粒，從而分離出病毒單顆粒。本發(fā)明采用微吸管法、磁鑷子法或液滴微流控法結(jié)合納微復(fù)合球，實現(xiàn)對病毒單顆粒的捕獲、檢測和分離，本發(fā)明方法具有高效快速、成本低的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及基于納微復(fù)合球的病毒單顆粒分離方法。

背景技術(shù)

病毒研究的一項關(guān)鍵的基礎(chǔ)工作是需要獲得各種病毒顆粒和基因組信息。在常規(guī)生物學(xué)中，主要通過培養(yǎng)皿的單菌落技術(shù)、光學(xué)顯微操作的單顆粒技術(shù)，來獲得單菌落、單細胞，進而通過純培養(yǎng)和分子測序，獲得基因組。但由于病毒個體極其微小，絕大多數(shù)在15-200nm，采用這些生物學(xué)方法，難以獲得病毒單顆粒。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了基于納微復(fù)合球的病毒單顆粒分離方法。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

基于納微復(fù)合球的病毒單顆粒分離方法，取含有納微復(fù)合球的陣列的芯片，所述納微復(fù)合球由納米球鑲嵌在微米球上的納米孔組成，所述納米球具有病毒吸附能力，所述微米球表面對病毒沒有特異性吸附能力，球內(nèi)部含有磁性顆粒，利用所述納微復(fù)合球上的納米球捕獲病毒溶液中的病毒，得到病毒-納微球復(fù)合顆粒，分離出單個病毒-納微球復(fù)合顆粒，從而分離出病毒單顆粒。

進一步地，所述納米球直徑為5-1500nm，表面經(jīng)氨基化、羧基化、生物素化或量子點修飾。

進一步地，所述微米球的直徑為1-25μm，表面經(jīng)熒光或量子點修飾。

進一步地，所述病毒單顆粒的分離步驟如下：

A1、取含有納微復(fù)合球的陣列的芯片，將含有病毒的溶液添加到所述芯片表面，病毒顆粒被吸附在納微復(fù)合球的納米球上；

A2、用不含病毒的液體洗滌芯片，通過芯片底面負壓抽吸過濾，經(jīng)若干次淋洗和過濾去除多余的病毒；

A3、取出所述芯片，用電子顯微鏡觀察并記錄吸附了單個病毒的納微復(fù)合球的位置；

A4、在光學(xué)顯微鏡下用磁鑷子或者微吸管，捕獲吸附了單個病毒的納微復(fù)合球，從而得到單個病毒顆粒。

進一步地，所述不含病毒的液體為去離子水。

進一步地，所述病毒單顆粒的分離步驟如下：

B1、取含有納微復(fù)合球的陣列的芯片，將納微復(fù)合球從所述芯片上取出；

B2、將納微復(fù)合球加入到含有病毒的溶液中，病毒吸附固定在所述納微復(fù)合球的納米球上；

B3、采用離心法或磁吸附法去除未被吸附的病毒，重新懸浮得到吸附了病毒顆粒的納微復(fù)合球溶液；

B4、以納微復(fù)合球溶液為流動相，油相為分散相，在液滴微流控系統(tǒng)中，先將單個納微復(fù)合球包裹在單個液滴中，然后單個液滴被分離，從而得到單病毒顆粒。

進一步地，步驟B1中所述將納微復(fù)合球從所述芯片上取出時采用超聲、磁分離或芯片底部正壓反向沖洗的方法。

進一步地，所述芯片采用多孔陶瓷過濾板或單晶硅板。

進一步地，所述納米球采用直徑為15-200nm的、表面經(jīng)氨基化修飾的二氧化硅納米球。

進一步地，所述微米球采用直徑為2-5μm的、表面經(jīng)熒光修飾的、球內(nèi)部含有納米磁性顆粒的聚苯乙烯微球。