[發(fā)明專利]基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110171675.2 | 申請日： | 2021-02-08 |
| 公開（公告）號： | CN112980806B | 公開（公告）日： | 2022-09-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 徐方成;徐玲惠;蔡佳達 | 申請（專利權(quán)）人： | 廈門大學;中國大洋礦產(chǎn)資源研究開發(fā)協(xié)會（中國大洋事務(wù)管理局） |
| 主分類號： | C12N7/02 | 分類號： | C12N7/02;C12R1/92 |
| 代理公司： | 廈門致群財富專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35224 | 代理人： | 劉兆慶 |
| 地址： | 361000 *** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 復合 病毒 顆粒 分離 方法 | ||
1.基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：取含有納微復合球的陣列的芯片，所述納微復合球由納米球鑲嵌在微米球上的納米孔組成，所述納米球具有病毒吸附能力，所述微米球表面對病毒沒有吸附能力，所述微米球內(nèi)部含有磁性顆粒，利用所述納微復合球上的納米球捕獲病毒溶液中的病毒，得到病毒-納微球復合顆粒，分離出單個病毒-納微球復合顆粒，從而分離出病毒單顆粒；所述納米球直徑為5-1300nm，表面經(jīng)氨基化、羧基化、生物素化或量子點修飾；所述微米球的直徑為2-25μm。
2.如權(quán)利要求1所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述微米球表面經(jīng)熒光修飾。
3.如權(quán)利要求1所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述微米球表面量子點修飾。
4.如權(quán)利要求2所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述病毒單顆粒的分離步驟如下：
A1、取含有納微復合球的陣列的芯片，將含有病毒的溶液添加到所述芯片表面，病毒顆粒被吸附在納微復合球的納米球上；
A2、用不含病毒的液體洗滌芯片，通過芯片底面負壓抽吸過濾，經(jīng)若干次淋洗和過濾去除多余的病毒；
A3、取出所述芯片，用電子顯微鏡觀察并記錄吸附了單個病毒的納微復合球的位置；
A4、在光學顯微鏡下用磁鑷子或者微吸管，捕獲吸附了單個病毒的納微復合球，從而得到單個病毒顆粒。
5.如權(quán)利要求4所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述不含病毒的液體為去離子水。
6.如權(quán)利要求2所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述病毒單顆粒的分離步驟如下：
B1、取含有納微復合球的陣列的芯片，將納微復合球從所述芯片上取出；
B2、將納微復合球加入到含有病毒的溶液中，病毒吸附固定在所述納微復合球的納米球上；
B3、采用離心法或磁吸附法去除未被吸附的病毒，重新懸浮得到吸附了病毒顆粒的納微復合球溶液；
B4、以納微復合球溶液為流動相，油相為分散相，在液滴微流控系統(tǒng)中，先將單個納微復合球包裹在單個液滴中，然后單個液滴被分離，從而得到單病毒顆粒。
7.如權(quán)利要求6所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：步驟B1中所述將納微復合球從所述芯片上取出時采用超聲、磁分離或芯片底部正壓反向沖洗的方法。
8.如權(quán)利要求4或6所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述芯片采用多孔陶瓷過濾板或單晶硅板。
9.如權(quán)利要求4或6所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述納米球采用直徑為15-200nm、表面經(jīng)氨基化修飾的二氧化硅納米球。
10.如權(quán)利要求4或6所述的基于納微復合球的病毒單顆粒分離方法，其特征在于：所述微米球采用直徑為2-5μm、表面經(jīng)熒光修飾的、球內(nèi)部含有納米磁性顆粒的聚苯乙烯微球。
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