[發明專利]一種斑馬魚鐵死亡模型的構建方法在審
| 申請號： | 202011098946.8 | 申請日： | 2020-10-14 |
| 公開（公告）號： | CN112226405A | 公開（公告）日： | 2021-01-15 |
| 發明（設計）人： | 王明勇;徐又佳;曹子厚 | 申請（專利權）人： | 蘇州木芮生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/073 | 分類號： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369 | 代理人： | 楊勝 |
| 地址： | 215000 江蘇省蘇州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 斑馬 死亡 模型 構建 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種斑馬魚鐵死亡模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)斑馬魚的繁殖：將性成熟的斑馬魚按雌雄比＝1:2的比例放入交配魚缸內，插上隔板，雌雄斑馬魚分開；隔夜后開燈換水，取出隔板，待30-60分鐘后收集魚卵；收集到的魚卵置于含E3的培養皿中，挑選受精魚卵，按100枚/盤的密度進行分盤，加入胚胎培養液，28℃恒溫孵育5小時；
2)鐵死亡模型的構建：挑選步驟1)中孵育正常的斑馬魚，按10-20條/孔的密度分布于6孔板中，加入E3培養液，28℃恒溫孵育24h；除去E3培養液，將6孔板中的受精卵隨機分為DMSO陰性對照組、Erastin處理組和枸櫞酸鐵銨處理組，分別向其中加入DMSO、Erastin溶液和枸櫞酸鐵銨溶液，恒溫培養48h；
3)鐵死亡模型的驗證：使用臺盼藍對所述DMSO陰性對照組、Erastin處理組和枸櫞酸鐵銨處理組的斑馬魚進行活體染色，檢測到細胞死亡現象，即得到斑馬魚鐵死亡模型。
2.如權利要求1所述的斑馬魚鐵死亡模型的構建方法，其特征在于，所述Erastin溶液的濃度為20μmol/L，枸櫞酸鐵銨溶液的濃度為200μg/ml。
3.如權利要求1所述的斑馬魚鐵死亡模型的構建方法，其特征在于，所述步驟2)中，恒溫培養的條件為28℃、避光處理。
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