本發明涉及表觀遺傳學技術領域，尤其指一種表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法，選取表觀遺傳學相關腫瘤細胞，采用細胞培養液進行體外培養，添加梯度濃度的表觀遺傳學藥物后培養；更換無表觀遺傳學藥物細胞培養液，繼續放入37℃二氧化碳培養箱中培養，提取DNA進行瓊脂糖凝膠電泳，采用透射電鏡進行細胞形態觀察，采用流式細胞儀進行細胞生長周期檢測。本發明采用腫瘤細胞體外培養的方式，在培養液中添加梯度濃度的表觀遺傳學藥物進行處理，并通過DNA瓊脂糖凝膠電泳、透射電鏡進行細胞形態觀察和流式細胞儀檢測細胞生長周期，來建立表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型，操作簡單、結果準確，有利于指導表觀遺傳學藥物在腫瘤治療中的應用。

技術領域

本發明涉及表觀遺傳學技術領域，尤其指一種表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法。

背景技術

表觀遺傳學修飾與腫瘤的發生發展密切相關，其主要通過DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA調控和染色質結構重構等方式對基因功能和表達水平進行調控，從而影響腫瘤的進展。目前針對表觀遺傳學的藥物已經逐漸應用于惡性腫瘤的治療，常見的藥物類型包括DNA 甲基轉移酶抑制劑和組蛋白去乙?；敢种苿祟愃幬锶源嬖谥T多不足之處廣泛的臨床應用仍需要進一步的研究，令人鼓舞的是表觀遺傳藥物與多種抗腫瘤藥物聯合應用已表現出巨大的應用潛力。表觀遺傳學的主要研究內容包括：DNA甲基化、組蛋白修飾、非編碼RNA 調控和染色質結構重構。表觀遺傳的修飾在不改變DNA序列的同時能調控基因的表達和(或)轉錄從而影響胚胎發育、干細胞的分化、衰老和腫瘤發生等過程。

DNA甲基化是指在甲基轉移酶(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)的催化下，將S腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)提供的甲基轉移到胞嘧啶5位的碳原子，形成5′甲基胞嘧啶。DNMT1主要是維持DNA甲基化，通過DNA復制將親代甲基化DNA遺傳到子代DNA。 DNMT3A和DNMT3B能將未甲基化的CpG位點甲基化，這在胚胎發育和腫瘤發生中起著重要作用。DNMT2是一種tRNA甲基轉移酶，而DNMT3L 是在胚胎發育過程中協調DNMT3A和DNMT3B的結構蛋白[10]。DNMT3C 最近由Barau等發現，主要涉及雄性生殖細胞系的反轉錄轉座子啟動子的甲基化。腫瘤特異性甲基化的基因能在循環腫瘤細胞 (circulating tumor cells,CTCs)、血液、尿液及其他體液中被檢測，因此常用于早期腫瘤的診斷和預后的研究。在結腸、前列腺、乳腺、肝臟腫瘤和白血病中也發現DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L的含量常常升高。研究表明DNMT3A的缺乏會引起部分基因的低甲基化并抑制白血病的轉化，但也有證據表明DNMT3A和DNMT3B是抑制淋巴系統惡性腫瘤的腫瘤抑制基因。

組蛋白是由H1、H3、H2A、H2B和H4這5種類型的核心蛋白組成的高度保守的蛋白質，并與DNA共同構成核小體。組蛋白氨基末端會在翻譯后被修飾，組蛋白修飾后的類型和DNA甲基化的程度將會決定特定的染色質結構。組蛋白修飾包括磷酸化、甲基化、乙酰化、泛素化、糖基化、ADP核糖基化、去氨基化、類泛素化和脯氨酸異構化等。組蛋白尾部殘端不同的修飾類型與特定蛋白相互作用，從而將染色質分為異染色質和常染色質。組蛋白修飾不僅可逆性抑制或促進基因轉錄而且還可以影響DNA修復、復制、干細胞形成和細胞狀態變化等過程。

與腫瘤的遺傳因素相比，可逆的表觀遺傳變異可以通過化學藥物調節，在癌癥治療中具有廣泛的前景。目前針對表觀遺傳學的藥物正在逐步被開發并用于腫瘤的治療。主要包括：DNA甲基轉移酶抑制劑、組蛋白去乙酰化酶抑制劑和聯合用藥。

DNA甲基轉移酶抑制劑(DNA methyltransferase inhibitors, DNMTis)通過抑制DNMTs的活性來促進抑癌基因的表達從而減少腫瘤細胞的產生，所以DNMTs可以作為特異性抗腫瘤藥物的有效靶點，其主要包括核苷類和非核苷類。核苷類抑制劑主要包括azacitidine (AZA)和decitabine。非核苷類DNMT抑制劑：非核苷類DNMT抑制劑在白血病，前列腺和乳腺癌中表現出良好的抗腫瘤作用