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[發明專利]一種表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法在審

專利信息
申請號: 202011051415.3 申請日: 2020-09-29
公開(公告)號: CN112226482A 公開(公告)日: 2021-01-15
發明(設計)人: 楊哲;張巧;易子寒;石瓊;賽步青;倪月莉 申請(專利權)人: 昆明醫科大學第一附屬醫院
主分類號: C12Q1/18 分類號: C12Q1/18;C12Q1/02;C12Q1/68;G01N15/14;G01N15/10
代理公司: 昆明合盛知識產權代理事務所(普通合伙) 53210 代理人: 牛林濤
地址: 650000 云*** 國省代碼: 云南;53
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 表觀 遺傳學 藥物 誘導 模型 構建 方法
【權利要求書】:

1.一種表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)選取表觀遺傳學相關腫瘤細胞,采用細胞培養液進行體外培養;

所述腫瘤細胞包括骨髓增生異常綜合征腫瘤細胞、皮膚T細胞淋巴瘤細胞、非小細胞肺癌細胞、乳腺癌細胞和前列腺癌細胞;

所述細胞培養液包括含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液;

所述體外培養包括37℃二氧化碳培養箱中培養;

2)待腫瘤細胞生長至對數生長期后,將腫瘤細胞轉移至4℃環境,使細胞生長同步化;

3)將步驟2)完成同步化生長的細胞分成不少于5組,分別向其中添加梯度濃度的表觀遺傳學藥物,放入37℃二氧化碳培養箱中培養;

所述表觀遺傳學藥物包括DNA甲基轉移酶抑制劑、組蛋白去乙酰化酶抑制劑和聯合劑;

所述聯合劑采用DNA甲基轉移酶抑制劑和組蛋白去乙酰化酶抑制劑混合制成。

4)將步驟3)培養后的細胞更換無表觀遺傳學藥物細胞培養液,繼續放入37℃二氧化碳培養箱中培養;

所述無表觀遺傳學藥物細胞培養液包括含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液;

5)收集步驟4得到細胞,提取DNA進行瓊脂糖凝膠電泳,記錄DNA瓊脂糖凝膠電泳結果,并通過DNA瓊脂糖凝膠電泳結果來衡量細胞凋亡的進程;

6)收集步驟4得到細胞,采用透射電鏡進行細胞形態觀察,通過細胞形態結果衡量細胞凋亡的進程;

7)收集步驟4得到細胞,采用流式細胞儀進行細胞生長周期檢測,通過檢測的G1期細胞、S期細胞、G2期細胞的占比來衡量細胞凋亡的進程。

2.根據權利要求1所述的表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,所述步驟3)中的培養時長為1-2小時。

3.根據權利要求1所述的表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,所述步驟4)中的培養時長為6-10小時。

4.根據權利要求1所述的表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,所述步驟6)中的細胞經過戊二醛溶液固定后,再經丙酮脫水,電子染色后采用透射電鏡進行細胞形態觀察。

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