[發明專利]一種表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法在審
| 申請號: | 202011051415.3 | 申請日: | 2020-09-29 |
| 公開(公告)號: | CN112226482A | 公開(公告)日: | 2021-01-15 |
| 發明(設計)人: | 楊哲;張巧;易子寒;石瓊;賽步青;倪月莉 | 申請(專利權)人: | 昆明醫科大學第一附屬醫院 |
| 主分類號: | C12Q1/18 | 分類號: | C12Q1/18;C12Q1/02;C12Q1/68;G01N15/14;G01N15/10 |
| 代理公司: | 昆明合盛知識產權代理事務所(普通合伙) 53210 | 代理人: | 牛林濤 |
| 地址: | 650000 云*** | 國省代碼: | 云南;53 |
| 權利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 表觀 遺傳學 藥物 誘導 模型 構建 方法 | ||
1.一種表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,包括以下步驟:
1)選取表觀遺傳學相關腫瘤細胞,采用細胞培養液進行體外培養;
所述腫瘤細胞包括骨髓增生異常綜合征腫瘤細胞、皮膚T細胞淋巴瘤細胞、非小細胞肺癌細胞、乳腺癌細胞和前列腺癌細胞;
所述細胞培養液包括含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液;
所述體外培養包括37℃二氧化碳培養箱中培養;
2)待腫瘤細胞生長至對數生長期后,將腫瘤細胞轉移至4℃環境,使細胞生長同步化;
3)將步驟2)完成同步化生長的細胞分成不少于5組,分別向其中添加梯度濃度的表觀遺傳學藥物,放入37℃二氧化碳培養箱中培養;
所述表觀遺傳學藥物包括DNA甲基轉移酶抑制劑、組蛋白去乙酰化酶抑制劑和聯合劑;
所述聯合劑采用DNA甲基轉移酶抑制劑和組蛋白去乙酰化酶抑制劑混合制成。
4)將步驟3)培養后的細胞更換無表觀遺傳學藥物細胞培養液,繼續放入37℃二氧化碳培養箱中培養;
所述無表觀遺傳學藥物細胞培養液包括含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液;
5)收集步驟4得到細胞,提取DNA進行瓊脂糖凝膠電泳,記錄DNA瓊脂糖凝膠電泳結果,并通過DNA瓊脂糖凝膠電泳結果來衡量細胞凋亡的進程;
6)收集步驟4得到細胞,采用透射電鏡進行細胞形態觀察,通過細胞形態結果衡量細胞凋亡的進程;
7)收集步驟4得到細胞,采用流式細胞儀進行細胞生長周期檢測,通過檢測的G1期細胞、S期細胞、G2期細胞的占比來衡量細胞凋亡的進程。
2.根據權利要求1所述的表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,所述步驟3)中的培養時長為1-2小時。
3.根據權利要求1所述的表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,所述步驟4)中的培養時長為6-10小時。
4.根據權利要求1所述的表觀遺傳學藥物凋亡誘導模型的構建方法,其特征在于,所述步驟6)中的細胞經過戊二醛溶液固定后,再經丙酮脫水,電子染色后采用透射電鏡進行細胞形態觀察。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于昆明醫科大學第一附屬醫院,未經昆明醫科大學第一附屬醫院許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服】
本文鏈接:http://www.17sss.com.cn/pat/books/202011051415.3/1.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇:一種新型聚晶金剛石制品及其制備方法
- 下一篇:一種三光柵拼接系統





