1.構建陸地棉抗蟲相關基因編輯突變體庫的方法，其特征在于，通過一次性快速構建混合載體文庫，經遺傳轉化獲得陸地棉基因編輯突變體庫材料，包括以下步驟：

S1、一種基于pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ載體，一次性快速構建基因編輯載體文庫的方法，具體地，構建方法通過以下步驟獲得：

(1)利用CRISPR-P 2.0軟件對陸地棉抗蟲基因設計及篩選特異的sgRNA序列；

(2)對篩選得到的sgRNA序列進行反向互補，然后在序列上游添加TTCTAGCTCTAAAAC序列，下游添加TGCACCAGCCGGGAAT用于引物合成；

(3)將pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ載體用BsaI進行充分酶切然后純化；

(4)將合成后的引物全部稀釋成相同的濃度，四十份引物等量混合成一個引物池用于PCR擴增，將PCR產物通過In-fusion連接到酶切后的pRGEB32-GhU6.7-NPTⅡ載體后通過熱激轉化大腸桿菌提取質粒后等量混合轉化農桿菌，大量收集農桿菌菌落獲得載體文庫；

S2、經遺傳轉化獲得陸地棉基因編輯突變體庫材料具體地構建方法通過以下步驟獲得：

(1)設計44條帶Barcode的引物用于檢測不同基因編輯突變體材料中插入sgRNA的情況，其引物序列表6所示；

(2)通過Barcode的上下游引物間的排列組合對基因編輯突變體材料進行PCR擴增后進行高通量檢測及分析獲得每株基因編輯突變體材料sgRNA插入情況；

(3)確定每株突變體的編輯位點后在編輯位點前后設計引物進行PCR擴增后進行高通量檢測及分析獲得每株基因編輯突變體材料基因編輯情況；

(4)針對棉花抗蟲性狀通過抗蟲鑒定結果尋找有抗感表型突變體株系與基因編輯結果相結合篩選昆蟲免疫相關有表型的抗感蟲陸地棉內源基因。