1.一種穩定表達熒光素酶及人源CD20敲除鼠源CD20的小鼠B細胞淋巴瘤A20-hCD20 Tg-mCD20 KO -Luciferase細胞系的制備方法，包括如下步驟：

1）構建穩定表達Luciferase熒光素酶以及人源CD20的轉基因質粒；

2）構建sgRNA用于鼠源CD20的敲除：在A20細胞的CD20基因的exon1的5’端和exon7的3’端設計sgRNA；

3）A20-hCD20 Tg -mCD20 KO -Luciferase細胞系構建：將步驟1）獲得的轉基因質粒及步驟2）獲得的sgRNA共轉A20細胞系；

4）A20-hCD20 Tg -mCD20 KO -Luciferase細胞系鑒定篩選；

其中，

步驟1）中，選取人源CD20基因CDS序列：SEQ ID NO：1及Luciferase基因：SEQ ID NO：2構建所述轉基因質粒；所述轉基因質粒中加入Neo元件，用于細胞藥篩；

步驟2）具體過程為：

a、分別合成sgRNA上下游引物，引物純化方式為PAGE，引物序列為：

5’端為：GPT000292-3-CD20-5S1和GPT000292-3-CD20-5S2；其中GPT000292-3-CD20-5S1的引物對由GPT000292-3-CD20-5S1-F：SEQ ID NO：11，和GPT000292-3-CD20-5S1-R：SEQID NO：12組成；GPT000292-3-CD20-5S2的引物對由GPT000292-3-CD20-5S2-F：SEQ ID NO：13，和GPT000292-3-CD20-5S2-R：SEQ ID NO：14組成；

3’端為：GPT000292-3-CD20-3S1和GPT000292-3-CD20-3S2；其中GPT000292-3-CD20-3S1引物對由GPT000292-3-CD20-3S1-F：SEQ ID NO：15，和GPT000292-3-CD20-3S1-R：SEQID NO：16組成；GPT000292-3-CD20-3S2引物對由GPT000292-3-CD20-3S2-F：SEQ ID NO：17，GPT000292-3-CD20-3S2-R：SEQ ID NO：18組成；

b、sgRNA上下游引物分別稀釋至100 μmol/μL，以1:1的配比混勻，95℃反應5min，室溫自行緩慢退火；

c、退火形成的雙鏈與Bsa I酶切的pUC57kan-T7-delG 載體連接2 h，轉化，涂布Kan+平板；

d、挑取單克隆，進行PCR鑒定，PCR鑒定方案為：

；

e、PCR陽性的單克隆進一步測序確認，測序引物為pUC57-T7-F；

f、以測序正確的克隆為模板，用如下引物PCR擴增sgRNA轉錄的DNA產物；

；

g、參照轉錄試劑盒說明書，以sgRNA轉錄的DNA產物為模板，轉錄sgRNA并進一步純化；

步驟1）中，通過HindIII+ASC1酶切、高保真酶PCR擴增、sLIC連接、質粒PCR鑒定和Not1線性化酶切鑒定構建篩選穩定表達Luciferase熒光素酶以及人源CD20的轉基因質粒；其中，高保真酶PCR擴增引物為GPT000292-3-pro-F：SEQ ID NO：3，GPT000292-3-pro-R：SEQID NO：4；以及GPT000292-3-CD20-F：SEQ ID NO：5，GPT000292-3-CD20-R：SEQ ID NO：6。