本發明公開了一種生物樣品檢測方法及檢測試劑盒，該方法通過免疫特異性結合磁珠的方式，形成三元復合物(磁珠?抗原?標記物)，在磁場作用下收集三元復合物。在特定化學試劑下，將三元免疫復合物中的標記物洗脫下來，在磁場作用下將標記物和磁珠分離，收集包含標記物的洗脫液并用強電解質重新分散。檢測標記物的洗脫液進而通過納米顆粒計數器從而實現絕對定量。本發明方法可以檢出常規免疫檢測檢出下限以下的痕量蛋白，在免疫學檢測、微生物檢測、細胞分離等領域可廣泛應用。

技術領域

本發明屬于生物分子檢測技術領域，具體涉及一種生物樣品的定量檢測方法。

背景技術

疾病的發生、發展與蛋白質的異常表達或特定蛋白表達密切相關。準確測定疾病相關蛋白的含量在傳染病防控、癌癥篩查和精準診斷等方面具有重要意義。

幾種常用的免疫學技術，酶聯免疫檢測是目前應用最廣泛的免疫檢測方法。該方法是將二抗標記上酶，抗原抗體反應的特異性與酶催化底物的作用結合起來，根據酶作用底物后的顯色顏色變化來判斷試驗結果，其敏感度可達ng水平。常見用于標記的酶有辣根過氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)等。由于酶聯免疫法無需特殊的儀器，檢測簡單，因此被廣泛應用于疾病檢測。常用的方法有間接法、夾心法以及BAS－ELISA。間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內，然后依次加入一抗、標記了酶的二抗和底物顯色，通過儀器(例如酶標儀)定量檢測抗原。這種方法操作簡單但由于高背景而特異性較差。目前已逐漸被夾心法取代。夾心法利用二種一抗對目標抗原進行捕獲和固定，在確保靈敏度的同時大大提高了反應的特異性。目前通用的夾心法需要一端連接可以直接或者間接發光的基團，會受到溶液環境和檢測器靈敏度的限制。

最近，Quanterix開發了一種可同時檢測數千個單個蛋白質分子的方法。使用與常規ELISA相同的試劑，該方法已用于以飛摩爾(fg/mL)濃度測量各種不同基質(血清，血漿，腦脊髓液，尿液，細胞提取物等)中的蛋白質，從而將靈敏度大約提高了1000倍。這種方法利用了飛升大小的反應室陣列，這些陣列稱為單分子陣列(Simoa^TM)，可以隔離和檢測單個酶分子。因為陣列體積比常規ELISA小約20億倍，所以如果存在標記的蛋白質，則會快速生成熒光產物。隨著擴散的消除，可以容易地觀察到這種高的局部產物濃度。只需一個分子即可達到檢測極限。該方法也被定義為數字ELISA。但是，Simoa方法還是依賴于計算每個反應室的光學信號強度通過柏松公式推算濃度，還不能實現完全的絕對定量。

發明內容

針對現有技術中所存在的不足，本發明的目的在于提供一種生物樣品的定量檢測方法。

本發明的另一個目的是提供一種生物樣品的定量檢測試劑盒。

本發明所采取的技術方案是：

一種生物樣品檢測方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)將修飾有第一結合物的磁珠與含有待分析物的樣品、及修飾有第二結合物的標記物混合，得混合液；

(2)除去混合液中未結合的修飾有第二結合物的標記物；

(3)將混合液中的標記物與磁珠分離；

(4)去除樣品中的磁珠，通過對標記物進行計數和/或電荷、粒徑測量得出樣品中待分析物的含量以及種類；

其中，第一結合物和第二結合物分別與所述樣品中的待分析物的第一結合位點、第二結合位點特異性結合。

作為優選的：步驟(2)的方法為：在磁場的控制下，吸附住混合物中的磁珠，除去混合液中未結合的修飾有第二結合物的標記物。其中，磁場的強度不低于0.0001T，優選為0.0001T-0.1T；

作為優選的：步驟(3)中，標記物和磁珠的分離可以是斷開磁珠與第一結合物的連接，或者斷開第一結合物與待分析物的結合，或者斷開第二結合物與待分析物的結合，或者斷開第二結合物與標記物的連接；