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[發明專利]用于培養MDCK細胞系的培養基及其制備方法在審

專利信息
申請號: 202010589171.8 申請日: 2020-06-24
公開(公告)號: CN111534478A 公開(公告)日: 2020-08-14
發明(設計)人: 詹烜子;鄭彩麗;張曉楠;劉德城;孔鳳英;謝玉紅;王土活;張云麗 申請(專利權)人: 肇慶大華農生物藥品有限公司
主分類號: C12N5/071 分類號: C12N5/071
代理公司: 廣州市時代知識產權代理事務所(普通合伙) 44438 代理人: 楊樹民
地址: 526238 廣東省肇*** 國省代碼: 廣東;44
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 用于 培養 mdck 細胞系 培養基 及其 制備 方法
【權利要求書】:

1.一種用于培養MDCK細胞的無血清培養基,其特征在于:所述用于培養MDCK細胞的無血清培養基中,各組分的濃度以mg/L計為:

基礎代謝營養物類:所述基礎代謝營養物類為絲氨酸5-55、鹽酸精氨酸20-250、亮氨酸20-55、異亮氨酸20-55、酪氨酸20-55、丙氨酸2-10、天冬酰胺2-25、天冬氨酸2-25、鹽酸半胱氨酸5-55、谷氨酸2-50、組氨酸5-55、賴氨酸20-250、苯丙氨酸10-55、蘇氨酸5-55、色氨酸5-25、纈氨酸20-250;

核苷酸類:所述核苷酸類為次黃嘌呤2-20、胸苷2-5、腺苷2-5、尿苷2-5;

微量元素類:所述微量元素類為硒0.05-0.1、鉻0.05-0.1、鈷0.02-0.05、鎳0.02-0.05、鋅0.05-0.1、銅0.05-0.1、錳0.05-0.1、鋇0.05-0.1、鎵0.02-0.05、鋰0.05-0.1、錫0.05-0.1、碘0.05-0.1、釩0.05-0.1、鍺0.02-0.05、鉬0.02-0.05、硅0.05-0.1、鐵0.05-0.1、銣0.02-0.05、鋯0.02-0.05、鎘0.05-0.1、鋁0.05-0.1;

維生素類:所述維生素類為生物素0.02-0.05、D-泛酸鈣0.05-0.1、葉酸0.02-0.05、煙酰胺0.02-0.05、鹽酸吡哆醇0.02-0.05、核黃素0.05-0.1、鹽酸硫胺素0.02-0.05、維生素B12 0.05-0.1、維生素B2 0.05-0.1、肌醇0.05-0.1;

鹽類:所述鹽類為氯化鈉200-500、氯化鉀200-500、硫酸銅2-55、硝酸鐵2-55、硫酸亞鐵2-55、氯化鎂2-55、無水磷酸氫二鈉20-250、磷酸二氫鈉20-250、亞硒酸鈉20-250、硫酸鋅2-55;

脂質體:所述脂質體為膽固醇1-5、卵磷脂0.02-0.05、月桂酸0.05-0.1、棕櫚酸0.05-0.1、吐溫-80 1-5;

添加物:所述添加物為D-葡萄糖500-7000、轉鐵蛋白2-55、胰島素2-55、牛血清白蛋白500-1000;

酸堿度緩沖劑:所述酸堿度緩沖劑為碳酸氫鈉10-1000;

酸堿度指示劑:所述酸堿度指示劑為酚紅1-20。

2.如權利要求1所述用于培養MDCK細胞的無血清培養基,其特征在于:所述培養基還包括:抗細胞結團劑硫酸葡聚糖20-150mg/L。

3.如權利要求1所述用于培養MDCK細胞的無血清培養基,其特征在于:所述培養基還包括:抗生素兩性霉素B 200-500mg/L。

4.如權利要求1所述用于培養MDCK細胞的無血清培養基,其特征在于:所述培養基支持MDCK細胞的全懸浮培養。

5.如權利要求1-4任一所述用于培養MDCK細胞的無血清培養基的制備方法,其特征在于,包括以下步驟:

1)制備混合液:將原料干粉用溶劑溶解并混合;

2)調節pH:調節混合液的pH;

3)定容:定容得到用于培養MDCK細胞的無血清培養基。

6.如權利要求5所述的制備方法,其特征在于:所述原料干粉溶解之前需研磨過篩,所述溶劑選自蒸餾水、去離子水、低級醇中的一種或幾種;所述調節pH的溶劑選自氫氧化鈉、氨水、氫氧化鉀中的一種或幾種;所述定容溶劑選自蒸餾水、去離子水中的一種或幾種。

7.如權利要求6所述的制備方法,其特征在于:所述過篩目數為50-200目,所述調節混合液的pH至6.0-7.0。

8.如權利要求7所述的制備方法,其特征在于:所述過篩目數為100目,所述調節混合液的pH至6.5。

9.如權利要求5所述的制備方法,其特征在于:所述定容后還包括過濾除菌步驟,采用0.22μm濾膜過濾除菌。

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