[發(fā)明專利]一種海水中海地瓜幼體生物量的檢測統(tǒng)計方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010370366.3 | 申請日： | 2020-05-06 |
| 公開（公告）號： | CN111593096A | 公開（公告）日： | 2020-08-28 |
| 發(fā)明（設計）人： | 蔣科技;劉守海;任遠豪;夏利花;李磊;季曉;王亞美;申耀中;李子牛;宋煒;張鳳英;馬凌波;王偉;皮妍;趙明 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所;國家海洋局東海環(huán)境監(jiān)測中心（國家海洋局東海海洋工程勘察設計研究所） |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 上海申浩律師事務所 31280 | 代理人： | 李陽 |
| 地址： | 200090 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 海水 海地 幼體 生物量 檢測 統(tǒng)計 方法 | ||
1.一種海水中海地瓜幼體生物量的檢測統(tǒng)計方法，其特征在于，其包括以下步驟：
S1、使用《海洋動物基因組DNA提取試劑盒》提取海地瓜成體DNA，設計海地瓜成體DNA中COⅠ基因的引物，使用COⅠ基因的引物進行PCR擴增，測序得到COⅠ基因序列，將COⅠ基因序列進行Blast比對，鑒定出該COⅠ基因序列為海地瓜的COⅠ基因序列；
其中，COⅠ基因的引物序列為：
上游序列：GACATGGCTTTCCCACGAATG
下游序列：GCTCGTGTGTCTACGTCCA
PCR擴增時，其退火溫度為53℃；
S2、以步驟S1得到的PCR產(chǎn)物為起始標準品，制作4個濃度梯度10-2、10-3、10-4、10-5的標準品；
S3、根據(jù)測序得到的海地瓜COⅠ基因序列，設計熒光定量PCR特異性引物，并驗證引物特異性，驗證通過后，再通過熒光定量PCR絕對定量得到CT值-DNA濃度對數(shù)值的標準曲線及對應的直線方程；
熒光定量PCR特異性引物序列為：
上游序列：GAGGTGTGGGTACAGGATGA
下游序列：CTTAGTAAGAGGAGGAAGGCGG
PCR擴增時，其退火溫度為：60℃；
S4、取不同干重的海地瓜組織并提取DNA，并以不同干重的海地瓜組織所對應的DNA為模板進行熒光定量PCR定量測試，根據(jù)步驟S3的標準曲線得到不同干重的海地瓜組織的DNA所對應的濃度值，進而得到DNA質(zhì)量與海地瓜組織干重的趨勢直線方程；
S5、聯(lián)立步驟S3中的CT值-DNA濃度對數(shù)值的直線方程和步驟S4中的DNA質(zhì)量與海地瓜組織干重的直線方程，以得到海地瓜組織干重與CT值之間的推導關(guān)系式，通過熒光定量PCR測出待測海水樣品中DNA的CT值，并將CT值帶入推導關(guān)系式計算可得到待測海水樣品中海地瓜幼體DNA的濃度值，根據(jù)待測海水樣品中DNA體積，計算得到待測海水樣品中所含海地瓜幼體的DNA質(zhì)量；
S6、通過待測海水樣品中海地瓜幼體的干濕重比例以及推導關(guān)系式計算得到海地瓜幼體的濕重。
2.如權(quán)利要求1所述的海水中海地瓜幼體生物量的檢測統(tǒng)計方法，其特征在于，步驟S3中，CT值-DNA濃度對數(shù)值的標準曲線的直線方程為：y＝-3.956x+13.139。
3.如權(quán)利要求1所述的海水中海地瓜幼體生物量的檢測統(tǒng)計方法，其特征在于，步驟S4中，海地瓜組織的不同干重分別為：10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、90mg、120mg。
4.如權(quán)利要求1所述的海水中海地瓜幼體生物量的檢測統(tǒng)計方法，其特征在于，步驟S4中，DNA質(zhì)量與海地瓜組織干重的趨勢直線方程式為：y＝0.2266x。
5.如權(quán)利要求1所述的海水中海地瓜幼體生物量的檢測統(tǒng)計方法，其特征在于，步驟S5中，海地瓜組織干重與CT值之間的推導關(guān)系式為：N測＝n標*10(CT測–13.139)/-3.956*1*V測*10-3/0.2266，n測＝n標*10(CT測–13.139)/-3.956*1(N測表示海地瓜測試干重；n標表示標準品濃度；CT測表示測試水樣得到的CT值；V測表示水樣DNA模板體積；n測表示水樣測試得到的目標DNA濃度；n標+測表示標準品與水樣混合后的測試濃度。
6.如權(quán)利要求1所述的海水中海地瓜幼體生物量的檢測統(tǒng)計方法，其特征在于，步驟S6中，干濕重比例為：26.2％。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所;國家海洋局東海環(huán)境監(jiān)測中心（國家海洋局東海海洋工程勘察設計研究所），未經(jīng)中國水產(chǎn)科學研究院東海水產(chǎn)研究所;國家海洋局東海環(huán)境監(jiān)測中心（國家海洋局東海海洋工程勘察設計研究所）許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.17sss.com.cn/pat/books/202010370366.3/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
- 上一篇：一種加固式管道連接管
- 下一篇：永磁疊加定子無刷電機
