[發明專利]卵巢濾泡膜干細胞及其分離方法、培養方法和應用有效
| 申請號： | 202010214438.5 | 申請日： | 2020-03-24 |
| 公開（公告）號： | CN111593021B | 公開（公告）日： | 2023-08-18 |
| 發明（設計）人： | 項鵬;柯瓊;陳洪;李偉強 | 申請（專利權）人： | 中山大學 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074;A61K35/545;A61P15/08 |
| 代理公司： | 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100 | 代理人： | 羅毅萍 |
| 地址： | 510275 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 卵巢 濾泡膜 干細胞 及其 分離 方法 培養 應用 | ||
1.一種卵巢濾泡膜干細胞的分離方法，其特征在于，包括以下制備方法：
獲取卵巢組織：選擇年齡為4~10歲的雌性食蟹猴，獲取卵巢組織皮質部，剝離卵巢組織周圍脂肪，保留卵巢皮質基質，清洗，將卵巢皮質基質剪成組織碎塊；
培養：向組織碎塊中加入培養液，離心，離心轉速為1400~1600rpm?，離心時間為4~6min，保留沉淀，加入培養液重懸，在37±0.5℃、5±0.5%?CO2下孵育時間為20~30h，離心，離心轉速為1400~1600rpm，離心時間為4~6min，保留沉淀，加入培養液重懸，得到細胞懸液，接種培養，即得卵巢濾泡膜干細胞；所述培養步驟中的培養液DMEM-F12為基底液，包括以下濃度的成分：1nM地塞米松、1ng/ml?LIF、50ng/ml?胰島素、50ng/ml?轉鐵蛋白、50pg/ml亞硒酸鈉、20ng/ml?抑瘤素M、1%V/V非必需氨基酸、1%V/V?N2、2%?V/V?B27無血清添加劑、20ng/ml?bFGF、20ng/ml?EGF、20ng/ml?PDGF-BB、0.1mM?β-巰基乙醇。
2.一種卵巢濾泡膜干細胞的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：
向由權利要求1所述分離方法得到的卵巢濾泡膜干細胞中加入培養液進行傳代培養，所述培養液以DMEM-F12為基底液，包括以下濃度的成分：1nM地塞米松、1ng/ml?LIF、50ng/ml?胰島素、50ng/ml?轉鐵蛋白、50pg/ml亞硒酸鈉、20ng/ml?抑瘤素M、1%V/V非必需氨基酸、1%V/V?N2、2%?V/V?B27無血清添加劑、20ng/ml?bFGF、20ng/ml?EGF、20ng/ml?PDGF-BB、0.1mM?β-巰基乙醇。
3.一種卵巢濾泡膜干細胞的分化方法，其特征在于，包括以下步驟：
向由權利要求1所述分離方法得到的卵巢濾泡膜干細胞中加入誘導培養基進行分化培養，所述誘導培養基以DMEM-F12為基底液，包括以下濃度的成分：2%V/V?FCS、1nM?T3、1ng/ml?LH、70ng/ml?IGF-1、10ng/ml?PDGF-BB、50ng/ml?胰島素、50ng/ml?轉鐵蛋白、50pg/ml亞硒酸鈉。
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