本發明公開了一種酶法制備卵磷脂型PUFA的方法，屬于酶的分離與應用技術領域。通過在反應底物與酶接觸后添加熱處理工藝，調節反應產物中sn?1溶血磷脂型PUFA和sn?2溶血磷脂型PUFA的比例，促進sn?2溶血磷脂型PUFA的生成，進而促進卵磷脂型PUFA的生成，大大提高了卵磷脂型PUFA的生成效率和產物中卵磷脂型PUFA的含量。該方法操作簡單，反應速率快，能夠明顯提高產物中卵磷脂型PUFA的產量，且能有效避免PUFA的氧化，具有良好的經濟效益和工業應用前景。

技術領域

本發明屬于油脂加工技術領域，具體涉及一種酶法制備卵磷脂型PUFA的方法。

背景技術

PUFA(Polyunsaturated fatty acids)如亞油酸(C18:2n6)、共軛亞油酸(9c,11t-C18:2和10t,12c-C18:2)、α-亞麻酸(C18:3n3)、γ-亞麻酸(C18:3n6)、石榴酸(9c,11t,13c-C18:3)、十八碳四烯酸(C18:4n3)、EPA(C20:5n3)、DPA(C22:5n3)和DHA(C22:6n3)與人體的健康息息相關。研究表明，亞油酸是人體的必需脂肪酸，具有降低血液中的膽固醇和預防動脈粥樣硬化等功效；共軛亞油酸具有降低血脂、預防動脈粥樣硬化、調節免疫和炎癥等功效；α-亞麻酸也是人體的必需脂肪酸，具有抗炎、神經保護和預防心血管疾病等功效；γ-亞麻酸具有降血脂、預防心血管疾病和抗癌等功效；石榴酸具有抗肥胖、抗糖尿病和抗多種癌癥等功效；十八碳四烯酸、EPA、DPA和DHA不僅有助于大腦、神經和視網膜的發育，而且還具有抗炎、抗癌和預防心血管疾病等功效。通常，PUFA主要以游離脂肪酸、脂肪酸乙酯、甘油三酯和磷脂的形式存在。相比于其它幾種存在形式，當PUFA以磷脂形式存在時，PUFA具有最高的生物利用度。因此，制備磷脂型PUFA一直是當前的研究熱點。而在磷脂型PUFA中，相比于溶血磷脂型PUFA，卵磷脂型PUFA因其更高的穩定性和生物利用度而更受關注。

酶法酸解、轉酯化和酯化是制備卵磷脂型PUFA的常用手段。相比于酶法轉酯化和酯化制備卵磷脂型PUFA，酶法酸解具有反應速率快的優點，但酶法酸解制備卵磷脂型PUFA的過程中，卵磷脂易水解，且PUFA結合率較低，導致最終產物中卵磷脂含量通常低于20％，且卵磷脂中PUFA含量低于60％(Food Chem.,2014,157:132-140)；酶法轉酯化反應制備卵磷脂型PUFA反應速率較酶法酸解慢，產物中卵磷脂含量通常低于20％，且卵磷脂中PUFA含量低于60％，但酶法轉酯化制備卵磷脂型PUFA的過程中PUFA不易氧化，產品具有較好的理化性質(Catal.Commun.,2016,75:60-64)；酶法酯化制備卵磷脂型PUFA需要在真空條件下進行，雖然產物卵磷脂中PUFA結合率可達90％，但產物中卵磷脂含量通常在5％以下(FoodChem.,2017,226:165-170)。總之，目前酶法酸解、轉酯化、酯化制備卵磷脂型PUFA時，產物中卵磷脂含量普遍偏低，難以同時兼顧高卵磷脂含量和高PUFA含量。

發明內容

為解決上述問題，本發明的目的在于提供一種酶法制備卵磷脂型PUFA的方法，通過在反應底物與酶接觸后添加熱處理過程，大大提高了卵磷脂型PUFA的生成效率和產物中卵磷脂型PUFA的含量。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種酶法制備卵磷脂型PUFA的方法，包括以下步驟：

步驟1：將甘油磷酰膽堿與脂肪酸混合均勻；

步驟2：將步驟1得到的混合底物與固定化脂肪酶在真空條件下進行反應；

步驟3：將步驟2的反應產物經熱處理后，冷卻，再加入到步驟2反應后的混合底物中；

步驟4：循環步驟2與步驟3直至反應達到平衡，收集反應產物，得到卵磷脂型PUFA。

優選地，步驟1中，甘油磷酰膽堿與脂肪酸的摩爾比為1:10～40。