本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種脫落酸二醇的分離純化方法。具體技術方案為：將經過微生物發酵后含有脫落酸二醇的發酵液經過離心或者微濾除去菌體等固形物后，發酵清液上大孔吸附樹脂柱，進行吸附、解析，收集解析液，減壓濃縮得脫落酸二醇粗品；再經硅膠柱層析分離，以及結晶、重結晶純化，得到脫落酸二醇結晶產物。本發明提供了一種新的從微生物次生代謝產物中分離純化脫落酸二醇的方法，而且，操作簡單、耗時短，易于產業化放大，得到的脫落酸二醇產物的純度可以達到98％以上。

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種脫落酸二醇的分離純化方法。

背景技術

脫落酸二醇是一種具有調節植物生長活性、與脫落酸結構相似的結構類似物。

脫落酸是一種廣泛存在于植物體內調節植物生長的物質，是由三個異戊二烯單位組成的倍半萜酸，化學名為5-(1’-羥基-2’,6’,6’-三甲基-4’-氧代-2’-環己烯-1’-基)-3-甲基-2-順-4-反-戊二烯酸，結構式如下：

脫落酸應用于農作物的抗逆增產增值栽培，可以激活作物的免疫抗病能力，顯著提高作物抗旱、抗寒、抗澇、抗鹽堿等抗逆能力，增強植物損傷修復能力，降低病害發生率，減少化學農藥用量，大幅度降低災害損失，促進作物生長，改善品質。

近十年來，在全球發展綠色生態農業的呼聲越來越高，對綠色農業生產資料的需求越來越大的環境下，脫落酸的應用技術研究得到快速發展。

但是，脫落酸對紫外光敏感，屬強光分解化合物。研究表明，在陽光波長照射下的結果是脫落酸快速的發生異構化，形成反式結構的脫落酸，脫落酸反式異構體較天然順式脫落酸的植物活性喪失許多。因此，國內外研究者一直在研究尋找具有高活性、性質穩定的脫落酸類似物。

截止目前為止，人們采用多種方法進行全合成，得到了多種脫落酸類似物。但是，由于合成路線長、總收率低，因而價格昂貴，未能應用于農業生產，因此尋找一種簡便、同時具有高活性的脫落酸類似物的合成方法，具有重大的現實意義與廣闊的應用前景。由于微生物種類繁多,次生代謝產物多樣化，因此，從微生物次生代謝產物中發掘脫落酸類似物是一條重要的途徑。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種脫落酸二醇的分離純化方法，使得到的脫落酸二醇產物的純度可以達到98％以上。

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：

本發明公開了一種脫落酸二醇的分離純化方法，將含有脫落酸二醇的發酵液除去固形物后，將發酵清液進行吸附、解析，收集解析液，減壓濃縮得脫落酸二醇粗品；再經硅膠柱層析分離，以及結晶、重結晶純化，得到脫落酸二醇結晶產物。

脫落酸二醇的結構式為：

優選的，包括以下步驟：

(1)將經過微生物發酵后的含有脫落酸二醇的發酵液經過濾后，得到發酵清液；

(2)將得到的發酵清液用大孔吸附樹脂吸附，然后用低級醇進行解析，得到解析液，并經減壓濃縮得到浸膏；

(3)將所述浸膏經吸附柱層析，得到的洗脫液經減壓濃縮后，進行結晶、重結晶和干燥得到脫落酸二醇結晶產物。

優選的，步驟(1)中，將發酵液用氫氧化鈉調節pH值至2～6。

優選的，步驟(2)中，所述大孔吸附樹脂為S-8、DA-201、D-101、X-5、DM-130、DM301中的任意一種。

優選的，步驟(2)中，所述低級醇為甲醇或乙醇，所述低級醇的體積濃度為20～100％。

優選的，所述低級醇的體積濃度為80～100％。