本發明公開了一種同時檢測血液樣品中多種水溶性維生素的方法，首先通過簡單的提取方法對生物樣本進行前處理，然后進入色譜分離及質譜檢測，針對每種維生素分別選擇一對定性離子和一對定量離子，以各種維生素的相對保留時間和定性離子對作為定性依據，以標準品制作標準曲線定量。同時，本方法應用三個水平的質控品考察方法的準確性、有效性，避免檢測結果失真。本發明首次實現了應用LC?MS技術對一份血清樣本中的十三種水溶性維生素同時檢測的目的，減小了干擾物影響，該方法操作簡便快速分析時間僅10min，高通量、成本低，有效監測人體內水溶性維生素水平，對維生素的合理、安全補充具有指導意義，易于臨床推廣及普及。

技術領域

本發明屬于維生素分析檢測領域，涉及一種同時檢測血液樣品中多種水溶性維生素的方法及其應用。

背景技術

維生素，分為脂溶性和水溶性維生素兩類，是維持人體生命活動必須的一類有機物質，也是保持人體健康的重要活性物質。維生素缺乏或過量均會導致營養性疾病的發生，維生素B1，維生素B2，維生素B3-煙酸，維生素B3-煙酰胺，維生素B5，維生素B6-吡哆胺，維生素B6-吡哆醛，維生素B6-吡哆醇，維生素B7，維生素B9，維生素B12，維生素B13和維生素C均屬于水溶性維生素，人體十三種水溶維生素缺乏或過量時會表現出不同的癥狀：維生素B1缺乏會導致腳氣病；厭食、腹脹、消化不良、便秘；心臟功能失調等；維生素B2缺乏會導致舌炎、口角炎；脂溢性皮炎；妊娠婦女缺鐵性貧血等；維生素B3缺乏可產生糙皮病，表現為皮炎、舌炎、口咽、腹瀉及煩躁、失眠感覺異常等癥狀等；維生素B5缺乏會導致痛風或風濕性關節炎；低血糖等；維生素B6缺乏會導致慢性炎癥；神經興奮性增強、煩躁不安、睡眠不安、全身性抽搐等；維生素B7缺乏會導致皮炎、濕疹、生長遲緩；維生素B9缺乏會導致巨幼紅細胞性貧血；高同型半胱氨酸血癥；流產、早產、胎兒神經血管畸形、先天愚形。維生素B12缺乏會產生巨紅細胞性貧血(惡性貧血)，脊髓變形，神經和周圍神經退化等；牙齦出血以及惡心、食欲不振、體重減輕等癥狀；維生素B13具有改善肝功能，促進肝細胞的修復作用和其它新功能?？芍委熗达L病，改進腦血管循環，增加吞噬細胞活性，提高組織再生能力，有助于治愈傷口。還可用于免疫輔藥；維生素C缺乏會壞血癥；口瘡和口腔潰瘍、牙齦出血、牙齒松動、皮膚色素沉著等癥狀。

現有技術中，常用的維生素檢測方法主要包括毛細管電泳法、電化學分析法、高效液相色譜法、高效液相色譜質譜聯用法等。其中電泳法、電化學法、高效液相色譜法存在一定的缺點，如：結果差異大、線性差、衍生化操作復雜、通量小等。而液相色譜質譜具有高靈敏度、高精確度、高通量的特點，因此，研究出一種基于液相色譜質譜聯用的方法測定體內維生素并將其應用于臨床愈發顯得重要。

發明內容

本發明目的在于提供一種檢測血液樣品中多種水溶性維生素的液質聯用分析方法。

本發明所采取的技術方案是：

本發明第一方面，提供了一種血液水溶性維生素的檢測方法，采用液質聯用方法進行檢測，包括以下步驟：

一.溶液的制備

供試品溶液制備：取樣品加入到甲醇、乙腈溶液中，混勻離心，取上清后再加入水：甲醇，得供試品溶液；

標準品溶液的制備：將各標準品用甲酸和甲醇/水溶液溶解配制成標準品母液，將各標準品母液液用乙腈/甲醇進行稀釋至同一容量瓶中，得到系列不同濃度的混合標準品溶液；

內標溶液制備：將各內標用甲酸和甲醇/水溶液溶解配制成標準品母液，將各標準品母液液用乙腈/甲醇進行稀釋至同一容量瓶中，得到系列不同濃度的混內標溶液；

二.測定

將上述制備的供試品溶液、標準品和內標溶液進行LC-MS測定。通過本發明使用超高效液相色譜-質譜法檢測血清中十三種水溶性維生素，特異性強，靈敏性高，通量高，結果客觀易于分析，尤其適合臨床普及應用。

根據本發明的實施例，所述樣品為血漿或血清樣品。