本發明涉及檢測ABCB1和LDLR基因多態性的引物及探針組合物、試劑盒、方法，該檢測ABCB1和LDLR基因多態性的引物及探針組合物包括：用于檢測ABCB1位點的第一引物和第一探針；以及，用于檢測LDLR位點的第二引物和第二探針；其中，第一引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1?4所示，第一探針的核苷酸序列如SEQ ID No.9?10所示；第二引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5?8所示，第二探針的核苷酸序列如SEQ ID No.11?12所示。本發明具有檢測通量高、操作簡便、快速且安全的優點。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術，特別涉及一種檢測ABCB1和LDLR基因多態性的引物及探針組合物、試劑盒、方法。

背景技術

根據我國流行病學調查，中國成人血脂異常總體患病率在2012年高達40.4％，較10年前呈大幅度上升，而血清總膽固醇(TC)水平的升高將導致未來中國心血管病事件增加約920萬。低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)或TC升高為特點的血脂異常是動脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)重要的危險因素，因此降低LDL-C水平，可顯著減少ASCVD的發病及死亡危險。LDL-C每降低1mmol/L(38mg/dL)，患主要心血管事件的風險可降低20％，全因死亡率可降低10％，而非心血管事件引起的死亡率并未增加。

他汀類藥物又稱為3-羥甲基-3-甲基戊二酰輔酶A(HMGCo A)還原酶抑制劑，近20多年來的眾多大規模臨床試驗結果顯示，他汀類藥物在ASCVD一級和二級預防中均能顯著降低心血管事件風險，是防治此類疾病最為重要的藥物。然而不同的他汀在化學結構上雖有相似之處，但它們在藥代動力學(吸收、結合血漿蛋白、代謝和溶解度)與其他藥物相互作用、藥物療效以及他汀導致的不良反應方面存在個體間的差異，而這些差異部分是歸因于常見藥物基因的遺傳與變異，ABCB1和LDLR基因則是近年來研究比較多的熱點基因。

三磷酸腺苷結合盒轉運子A1(ABCA1)基因所編碼的ABCA1蛋白在膽固醇的逆向轉運和機體高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的形成中起到關鍵作用。當ABCA1基因發生突變時，可影響其蛋白質的轉錄和翻譯，從而影響機體血脂水平。在已發現的ABCB1的將近50個SNP中，2677TG和3435CT均能夠影響P-gp的轉運底物，導致阿托伐汀療效的個體化出現差異。相關學者研究發現ABCA1基因多態性與機體血脂異常等疾病存在相關性。

低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor，LDLR)由Brown等發現，認為LDLR與血脂代謝異常密切相關。LDLR基因在人類基因組位于第19號染色體短臂末端(19p13.1～13.3)，在基因組中的長度為45kb，含有18個外顯子。LDLR基因突變與血脂異常相關性疾病密切相關，LDLR基因的異常表達可導致低密度脂蛋白膽固醇(low densitylipoprotein-cholesterol，LDL-C)的清除障礙，使LDL-C在血漿中極度升高，導致高膽固醇血癥、動脈粥樣硬化(atherosclero-sis，AS)等疾病。在藥物基因組學權威數據庫PharmGKB中顯示LDLR基因突變rs1433099(c.666TC)和rs14158(c.52GA)與他汀類的療效有密切關系。

現有他汀類藥物個體化基因檢測的方法包括PCR-直接測序法、PCR-基因芯片法和熒光定量PCR法等多種方法，每種方法的原理和優缺點如下：