[發(fā)明專利]檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的引物及探針組合物、試劑盒、方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010052777.8 | 申請(qǐng)日： | 2020-01-17 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN111154862A | 公開(kāi)（公告）日： | 2020-05-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉福平;劉晶晶;鄭建權(quán) | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 深圳會(huì)眾生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6883 | 分類號(hào)： | C12Q1/6883;C12N15/11 |
| 代理公司： | 深圳市博銳專利事務(wù)所 44275 | 代理人： | 湯星星 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市寶安區(qū)航*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書(shū)： | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū)： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測(cè) abcb1 ldlr 基因 多態(tài)性 引物 探針 組合 試劑盒 方法 | ||
1.檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的引物及探針組合物，其特征在于，包括：用于檢測(cè)ABCB1位點(diǎn)的第一引物和第一探針；以及，用于檢測(cè)LDLR位點(diǎn)的第二引物和第二探針；
其中，第一引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1-4所示，第一探針的核苷酸序列如SEQ IDNo.9-10所示；第二引物的核苷酸序列如SEQ ID No.5-8所示，第二探針的核苷酸序列如SEQID No.11-12所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的引物及探針組合物，其特征在于，所述第一探針和第二探針的3’和5’端分別進(jìn)行熒光標(biāo)記。
3.檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1-2中任意一項(xiàng)所述的檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的引物及探針組合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的試劑盒，其特征在于，還包括MgCl2、dNTP和Tap酶；
所述MgCl2的終濃度為1-5mM；所述dNTP的終濃度為100-200nM；所述Tap酶的終濃度為2-5U。
5.檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)提取樣品DNA；
(2)采用PCR溶解曲線法，利用權(quán)利要求3或4所述的檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的試劑盒對(duì)樣品DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；
(3)通過(guò)監(jiān)測(cè)整個(gè)溶解過(guò)程當(dāng)中的信號(hào)值隨溫度的變化規(guī)律，區(qū)分靶序列的基因型。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的方法，其特征在于，步驟(2)中，利用權(quán)利要求4所述的檢測(cè)ABCB1和LDLR基因多態(tài)性的試劑盒對(duì)樣品DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；采用PCR溶解曲線法進(jìn)行PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：
第一階段：95℃，5min，1個(gè)循環(huán)；
第二階段：95℃，15s；57℃，30s；72℃，30s；35個(gè)循環(huán)；
第三階段：94℃，1min；40℃，2min；40-80℃，并收集熒光信號(hào)；1個(gè)循環(huán)。
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