本發明涉及一種篩選方法，具體涉及一種疫苗菌株的篩選方法。本發明疫苗菌株的篩選方法包括以下步驟：待篩選菌株分離培養；鑒定待篩選菌株是否為所需種類的疫苗菌株，如果是，則進行后續操作；鑒定待篩選菌株的血清型；獲取待篩選菌株的基因指紋；建立混合菌株感染模型，以獲得最佳攻毒劑量以及攻毒后最佳分離待篩選菌株的時間；篩選優勝者菌株及最佳優勝者；將最佳優勝者中的各菌株按照相同的劑量制備滅活苗，進行免疫，保護效果最佳的菌株即為所需的疫苗菌株。本發明提供了一種高效的疫苗菌株篩選方法，該方法篩選時間短，易于操作，方便快捷，同時大幅度降低了成本，能達到快速篩選的目的。

技術領域

本發明涉及一種篩選方法，具體涉及一種疫苗菌株的篩選方法。

背景技術

疫苗菌株通常選用保護效率高，免疫劑量小，容易培養且生產成本低的菌株。在某種細菌研究背景知識模糊，毒力因子尚不明確時，疫苗菌株的篩選方法通常的是，依次對各個分離株進行毒力的測定，常用不同劑量的細菌感染易感動物，通過測定最小致死量(MLD)和/或半數致死量(LD50)還可以用最小感染量(MID)和/或半數感染量(ID50)來評價。這些方法都需要將臨床分離的細菌一一測定，工作量較大，比較費時費力，限制了能夠參與篩選的菌株的數量。

RA感染是發生在鴨、鵝、火雞等禽類的一種接觸傳染性疾病，通常稱該病為鴨傳染性漿膜炎，該病呈急性或慢性經過，其特征是纖維素性心包炎、肝周炎、氣囊炎、干酪性輸卵管炎和腦膜炎。該菌主要侵害1～8周齡鴨，是長期以來是危害國內外養鴨業的一種主要疫病。由于RA血清型眾多(目前已鑒定出25種血清型)且交叉保護效果幾乎沒有，只有同血清型的RA才能有效保護同血清型的RA感染，而且，即使是同一種血清型的RA，對同血清型RA的感染能夠提供的保護力也是不同的，如何從同血清型的RA中來篩選到最好的菌株，用常用的篩選疫苗菌株方法有諸多局限。

發明內容

本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種疫苗菌株的篩選方法，該方法篩選效率高。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：一種疫苗菌株的篩選方法，其包括以下步驟：

(1)待篩選菌株分離培養：從疑似病理組織中獲取含菌病料，進行分離培養，得到待篩選菌株；

(2)鑒定待篩選菌株是否為所需種類的疫苗菌株，如果是，則進行后續操作；

(3)鑒定待篩選菌株的血清型；

(4)獲取待篩選菌株的基因指紋；

(5)混合菌株感染模型的建立:從步驟(1)所得待篩選菌株中挑取單菌落，進行培養后調整菌株濃度，選取相同血清型的不同待篩選菌株進行多個菌株同樣的濃度混合，每個組內多個菌株的濃度一樣，按照不同細菌濃度得到多個混合組；且同混合組內待篩選菌株的基因指紋不同；然后進行攻毒，在攻毒后不同時間梯度分離菌株，以獲得最佳攻毒劑量以及攻毒后最佳分離待篩選菌株的時間；

(6)從步驟(1)所得待篩選菌株中重新挑取單菌落，按照步驟(5)建立多個混合組，并篩選出每個混合組中的1～3個優勝者；

(7)重復步驟(6)從而獲得多個優勝者，測序各個優勝者的基因指紋，然后再將多個優勝者組成新的小組，按照步驟(6)的方式繼續篩選，得到多個最佳優勝者；

(8)將最佳優勝者中的各菌株按照相同的劑量制備滅活苗，進行免疫和交叉保護試驗，保護效果最佳的菌株即為所需的疫苗菌株。

本發明提供了一種簡捷的篩選疫苗菌株的新方法，該方法通過混合菌株感染試驗動物，確定了最佳混合感染劑量及優勢菌種進入動物腦部的最佳時間(步驟(5)分離菌株時可從腦部分離)，然后將從試驗動物中分離出的優勢菌株進行驗證，篩選出優勢菌種。