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[發明專利]一種疫苗菌株的篩選方法有效

專利信息
申請號: 202010037421.7 申請日: 2020-01-14
公開(公告)號: CN111197095B 公開(公告)日: 2023-07-07
發明(設計)人: 劉軍發;邢娟娟;周祺;楊德鴻;麥凱杰;羅翠芬;周慶豐;劉士奇 申請(專利權)人: 溫氏食品集團股份有限公司
主分類號: C12Q1/689 分類號: C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202 代理人: 郝傳鑫;王蘭蘭
地址: 527400 廣東*** 國省代碼: 廣東;44
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 疫苗 菌株 篩選 方法
【權利要求書】:

1.一種疫苗菌株的篩選方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)待篩選菌株分離培養:從疑似病理組織中獲取含菌病料,進行分離培養,得到待篩選菌株;

(2)鑒定待篩選菌株是否為所需種類的疫苗菌株,如果是,則進行后續操作;

(3)鑒定待篩選菌株的血清型;

(4)獲取待篩選菌株的基因指紋;

(5)混合菌株感染模型的建立:?從步驟(1)所得待篩選菌株中挑取單菌落,進行培養后調整菌株濃度,選取相同血清型的不同待篩選菌株進行多個菌株同樣的濃度混合,每個組內多個菌株的濃度一樣,按照不同細菌濃度得到多個混合組;且同混合組內待篩選菌株的基因指紋不同;然后進行攻毒,在攻毒后不同時間梯度分離菌株,以獲得最佳攻毒劑量以及攻毒后最佳分離待篩選菌株的時間;

(6)從步驟(1)所得待篩選菌株中重新挑取單菌落,按照步驟(5)建立多個混合組,并篩選出每個混合組中的1~3個優勝者;

(7)重復步驟(6)從而獲得多個優勝者,測序各個優勝者的基因指紋,然后再將多個優勝者組成新的小組,按照步驟(6)的方式繼續篩選,得到多個最佳優勝者;

(8)?將最佳優勝者中的各菌株按照相同的劑量制備滅活苗,進行免疫和交叉保護試驗,保護效果最佳的菌株即為所需的疫苗菌株;

所述步驟(4)中,獲取待篩選菌株的基因指紋的方法包括以下步驟:

(4a)基因組提取:從步驟(1)所得待篩選菌株中挑取單菌落,培養后提取基因組;

(4b)采用PCR擴增步驟(4a)所得基因組的高變異片段,通過電泳檢測PCR擴增產物,并進行膠回收;

(4c)進行測序分析,然后對比測序結果,得到待篩選菌株的基因指紋;

所述疫苗菌株為鴨疫里默氏桿菌,所述步驟(4b)中的高變異片段為CRISPR?spacer序列;

所述步驟(4b)中,PCR擴增的試劑包括如SEQ?ID?NO:?1和SEQ?ID?NO:?2所示的引物。

2.如權利要求1所述的疫苗菌株的篩選方法,其特征在于,所述步驟(7)中,最佳優勝者為3-5株待篩選菌株。

3.如權利要求1~2任一項所述的疫苗菌株的篩選方法,其特征在于,所述疫苗菌株用于鴨。

4.如權利要求1所述的疫苗菌株的篩選方法,其特征在于,所述步驟(1)中,疑似病理組織為肝臟或鴨腦。

5.如權利要求1所述的疫苗菌株的篩選方法,其特征在于,所述步驟(4b)中,PCR擴增的試劑還包括2×Taq?PCR?Mix、雙蒸水、陰性對照品和陽性對照品。

6.如權利要求5所述的疫苗菌株的篩選方法,其特征在于,所述陰性對照品為雙蒸水,所述陽性對照品為鴨疫里默氏桿菌基因組。

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