本發明公開了一種全人源單克隆抗體的制備方法，所述全人源單克隆抗體來源于全人源單克隆雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株由人骨髓瘤細胞株組合和人外周血B淋巴細胞融合得到；其中，所述人骨髓瘤細胞株組合由人骨髓瘤細胞株RPMI 8226和K6H6/B5融合而成。本發明通過人骨髓瘤細胞株組合和人外周血B淋巴細胞融合得到的全人源單克隆抗體雜交瘤細胞株，由其產生的全人源單克隆抗體可在功能性全人源單克隆抗體的篩選、以及抗腫瘤全人源單克隆抗體藥物的開發中廣泛應用。

技術領域

本發明屬于技術領域，具體涉及一種全人源單克隆抗體的制備方法。

背景技術

單克隆抗體可用于抗原結構分析，分離、純化特定分子抗原,也用于臨床疾病的診斷和治療等。但是，目前單克隆抗體大多是鼠源性的，而鼠源性單克隆抗體應用于人體治療時存在諸多問題，導致單克隆抗體技術在臨床治療應用中的進展卻很慢。比如，鼠源單克隆抗體不能有效地激活人體中補體和Fc受體相關的效應系統；一旦被人體免疫系統所識別,將產生人抗鼠抗體，被人體循環系統中被很快清除掉。因此,在保持對特異性抗原表位高親和力的基礎上進行人源化改造,減少異源抗體的免疫原性,或進行全人源單克隆抗體的研制成為單克隆抗體研究的重點。

鼠源抗體的人源化改造技術、噬菌體抗體庫技術和轉基因鼠技術成為人源化改造和人源抗體制備的三大主要技術。現在進入臨床的抗體藥物大多以鼠源抗體人源化改造單抗為主。今后的抗體藥物逐漸以人源性抗體為主。我國單克隆抗體藥物市場尚處于起步期，市場銷售額只有幾千萬元人民幣，距離歐美發達國家的上百億美元還有很大差距。當前，人源抗體制備技術經過多年發展，催生了一大批抗體藥物在臨床中成功應用，從而使得全人源抗體成為單抗藥物的發展主流，但仍有一些問題亟待解決。例如，一方面，從制備技術上來說，已有兩種人源抗體制備技術廣泛應用于人源抗體的制備，但是人源抗體的生產成本目前依舊偏高。另一方面，從臨床應用上來說，人源抗體的免疫原性仍然較低。上述問題將成為人源抗體制備的主要挑戰，但隨著研究的深入，這一系列問題也必將得到有效地解決，人源抗體也將更加廣泛地被應用于臨床中。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

作為本發明其中一個方面，本發明提供一種全人源單克隆抗體的制備方法。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種全人源單克隆抗體的制備方法，其中：所述全人源單克隆抗體來源于全人源單克隆雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株由人骨髓瘤細胞株組合和人外周血B淋巴細胞融合得到；其中，所述人骨髓瘤細胞株組合由人骨髓瘤細胞株RPMI 8226和K6H6/B5融合而成。

作為本發明所述的全人源單克隆抗體的制備方法的一種優選方案：所述人骨髓瘤細胞株RPMI 8226和K6H6/B5的細胞數量比為2：1。

作為本發明所述的全人源單克隆抗體的制備方法的一種優選方案：所述人骨髓瘤細胞株組合和人外周血B淋巴細胞按照細胞數量比為3：1融合。

作為本發明所述的全人源單克隆抗體的制備方法的一種優選方案：所述融合，為利用pH 8.0～8.2的40％PEG 4000作為融合劑，在30℃水浴作用下處理45秒。