[發明專利]一種全人源單克隆抗體的制備方法在審
| 申請號： | 201911309757.8 | 申請日： | 2019-12-18 |
| 公開（公告）號： | CN111087469A | 公開（公告）日： | 2020-05-01 |
| 發明（設計）人： | 徐恒;杜夢潔;高歌 | 申請（專利權）人： | 南京泰奧德生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/18 | 分類號： | C07K16/18;C12N15/06 |
| 代理公司： | 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272 | 代理人： | 王江南 |
| 地址： | 210000 江蘇省南京市江北新區新錦*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 全人 單克隆抗體 制備 方法 | ||
1.一種全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述全人源單克隆抗體來源于全人源單克隆雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株由人骨髓瘤細胞株組合和人外周血B淋巴細胞融合得到；其中，所述人骨髓瘤細胞株組合由人骨髓瘤細胞株RPMI 8226和K6H6/B5融合而成。
2.如權利要求1所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述人骨髓瘤細胞株RPMI 8226和K6H6/B5的細胞數量比為2：1。
3.如權利要求2所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述人骨髓瘤細胞株組合和人外周血B淋巴細胞按照細胞數量比為3：1融合。
4.如權利要求1～3中任一項所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述融合，為利用pH 8.0～8.2的40％PEG 4000作為融合劑，在30℃水浴作用下處理45秒。
5.如權利要求4所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述融合，為將人骨髓瘤細胞株RPMI 8226和K6H6/B5用DMEM混合制成細胞懸液，與人外周血B淋巴細胞按細胞數量3:1混合，1000r/min離心10min，棄上清，使人骨髓瘤細胞和人B淋巴細胞充分混勻；在30℃水浴下，將1ml pH 8.0～8.2 40％PEG 4000加入融合管內，邊加邊輕輕攪動，靜置60秒，然后立即在90秒內加入30mL DMEM，終止反應；37℃水浴10min，1000r/min離心10min，棄上清，將細胞沉淀以含15％胎牛血清的HAT選擇培養液懸起，鋪入已加有飼養細胞的細胞板中，37℃，5％CO2培養箱培養。
6.如權利要求5所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：將飽和硫酸銨溶液作為包被液對所述全人源單克隆抗體進行包被，利用EILSA法進行陽性全人源單克隆抗體雜交瘤細胞株的篩選。
7.如權利要求6所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：包括，將陽性全人源單克隆抗體雜交瘤細胞株進行擴大培養，并沉淀濃縮全人源單克隆抗體，之后進行抗體純化。
8.如權利要求7所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述沉淀濃縮全人源單克隆抗體，為利用PEG6000沉淀蛋白后超速離心，獲得高純度高抗體滴度的全人源單克隆抗體。
9.如權利要求8所述的全人源單克隆抗體的制備方法，其特征在于：所述全人源單克隆抗體輕鏈的分子量大小為25KDa；全人源單克隆抗體重鏈的分子量大小為50KDa。
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