[發明專利]三聚體TRAIL融合蛋白基因修飾間充質干細胞的方法及其用途有效
| 申請號： | 201910977510.7 | 申請日： | 2019-10-15 |
| 公開（公告）號： | CN110669145B | 公開（公告）日： | 2021-08-27 |
| 發明（設計）人： | 劉廣洋;劉擁軍;李欣;張晨亮;米一;苗麗;馬靜;王皓 | 申請（專利權）人： | 北京貝來生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K35/28;A61P35/00 |
| 代理公司： | 北京中索知識產權代理有限公司 11640 | 代理人： | 劉翔 |
| 地址： | 100176 北京市大興區北京經濟*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 三聚體 trail 融合 蛋白 基因 修飾 間充質 干細胞 方法 及其 用途 | ||
1. 一種三聚體TRAIL基因修飾間充質干細胞的制備方法，其特征在于，所述基因修飾間充質干細胞可高表達三聚體TRAIL融合蛋白，所述融合蛋白的核酸序列如SEQID NO:1；
所述融合蛋白包括：
分泌信號蛋白，選自tPA，其核酸序列如SEQID NO:2；
肺表面活性物質蛋白，核酸序列如SEQID NO:3所示；
人源化腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體，核酸序列如SEQID NO:4所示；
包括如下步驟：
S1、獲取包含所述三聚體TRAIL融合蛋白的質粒；
S2、將步驟S1中的包含所述融合蛋白的質粒與輔助質粒混合培養，轉染細胞；
S3、將轉染的細胞轉染至間質干細胞中獲取可表達SPDcc-TRAIL蛋白的間充質干細胞；
所述輔助質粒包括：pMDLg、pRSV/REV和pMDNA2.G；
在步驟S2中，包含所述融合蛋白的質粒與輔助質?；旌吓囵B的步驟包括：
（1）將融合蛋白質粒和輔助質粒pMDLg、pRSV/REV、pMDNA2.G混合，將混合質粒溶解于Opti-MEM培養基中，靜置5min；
（2）再加入PLUS? 試劑，靜置5min；
（3）將Lipofectamine? LTX試劑與Opti-MEM溶液混合，靜置5min，將LTX試劑與含質粒載體的PLUS? 試劑混合均勻，靜置30min，獲得Lipofectamine? LTX-質?；旌吓囵B基。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述轉染為慢病毒轉染。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述間充質干細胞來自：骨髓組織、脂肪組織、臍帶組織或胎盤組織。
4.如權利要求1所述的三聚體TRAIL融合蛋白在制備抗腫瘤藥物中的應用。
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