本發明公開了一種口腔粘膜細胞培養方法，其特征在于，包括培養前的準備工作、具體的培養過程和培養后的結束工作，培養前的準備工作包括培養儀器的準備和口腔粘膜細胞的準備；本發明一種口腔粘膜細胞培養方法，本口腔粘膜細胞培養方法利用無血清培養基，細胞可穩定傳代4?5代，前三代細胞增殖能力強，第四代出現一定比例的巨細胞，第五代細胞則衰老，因而從組織工程的角度，本研究支持采用培養的第三代細胞，既滿足一定數量，又保證細胞有良好增殖能力，粘膜上皮細胞的傳代數與接種細胞數密切相關，不確定因素低，實驗效率高，本實驗在實驗前和實驗后均采用消毒殺菌處理，進一步降低了實驗的不確定因素，進而提高了實驗效率。

技術領域

本發明屬于口腔粘膜細胞培養技術領域，具體為一種口腔粘膜細胞培養方法。

背景技術

口腔里的細胞都是有著同樣的形態，功能，統稱為口腔細胞，口腔細胞培養是指模擬體內的生理環境，在適當的條件下，使活體組織細胞在體外環境存活、生長增殖，并維持其結構功能。

傳統的口腔粘膜細胞培養方法在實際的應用中沒有系統規范的實驗步驟，實驗的不確定因素眾多，需要作出多組對比試驗才能得到準確的實驗效果，極大程度的影響了實驗效率，例如消化液的準備以及培養基中主要離子的影響，不能夠較快的獲得純度較高的有典型性的上皮細胞特征的OMECS，對此需要設計一種口腔粘膜細胞培養方法。

發明內容

本發明提供一種口腔粘膜細胞培養方法，以解決上述背景技術中提到的問題。

為了解決上述技術問題，本發明提供了如下的技術方案：

一種口腔粘膜細胞培養方法，包括培養前的準備工作、具體的培養過程和培養后的結束工作。

作為本發明的一種優選技術方案，所述培養前的準備工作包括培養儀器的準備和口腔粘膜細胞的準備；

所述培養儀器的準備包括超凈工作臺、壓力蒸汽消毒器、電熱干燥箱、濾器、紫外燈、水和平衡鹽溶液的準備；

超凈工作臺：采用可調風量風機系統，在調節風機工作臺后，可使潔凈工作區的風速始終保持在理想范圍內，利用鼓風機驅動空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化，凈化空氣徐徐通過工作臺面，使工作臺內構成無菌環境；

壓力蒸汽消毒器：采用立式壓力蒸汽滅菌器，放置在實驗室通風口處；

電熱干燥箱：采用具有超溫偏保護、數字顯示的微電腦P.I.D溫度控制器，熱風循環系統由能在高溫下連續動轉的風機和合適風道組成，立限溫報警系統，超過限制溫度即自動中斷，保證實驗安全運行不發生意外；

濾器：用于大多數培養用液，如人工合成培養基、血清、酶液等采用濾過法除菌。

紫外燈：主要用于培養室空氣、操作臺、塑料培養皿和培養板等表面消毒；

水：新鮮配置的三蒸水或去離子水；

平衡鹽溶液：采用無Ca2+、Mg2+的緩沖液；

所述口腔粘膜細胞的準備是在無菌條件下收集日常領面外科手術中丟棄的多余粘膜，患者年齡3～60歲，置于體積分數為10％血清的DMEM中，PBS洗凈血跡，2.5g/L洗必泰液浸泡5～8min，盡量去除粘膜下組織，并切成0.3cmx1 cm大小的組織塊。