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[發明專利]一種口腔粘膜細胞培養方法在審

專利信息
申請號: 201910573344.4 申請日: 2019-06-28
公開(公告)號: CN110408537A 公開(公告)日: 2019-11-05
發明(設計)人: 馮全良 申請(專利權)人: 馮全良
主分類號: C12M3/00 分類號: C12M3/00;C12M1/12;C12M1/04;C12N5/071
代理公司: 暫無信息 代理人: 暫無信息
地址: 510000 廣東*** 國省代碼: 廣東;44
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摘要:
搜索關鍵詞: 口腔粘膜細胞 細胞 實驗效率 傳代 無血清培養基 細胞增殖能力 粘膜上皮細胞 接種細胞 培養儀器 消毒殺菌 增殖能力 組織工程 第三代 巨細胞 代數 衰老 保證 研究
【權利要求書】:

1.一種口腔粘膜細胞培養方法,其特征在于,包括培養前的準備工作、具體的培養過程和培養后的結束工作;

所述培養前的準備工作包括培養儀器的準備和口腔粘膜細胞的準備;

1.1、所述培養儀器的準備包括超凈工作臺、壓力蒸汽消毒器、電熱干燥箱、濾器、紫外燈、水和平衡鹽溶液的準備;

1.1.1、超凈工作臺:采用可調風量風機系統,在調節風機工作臺后,可使潔凈工作區的風速始終保持在理想范圍內,利用鼓風機驅動空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒,使空氣得到凈化,凈化空氣徐徐通過工作臺面,使工作臺內構成無菌環境;

1.1.2、壓力蒸汽消毒器:采用立式壓力蒸汽滅菌器,放置在實驗室通風口處,然后采用2.5%碘酊反復擦拭取材器械;

1.1.3、電熱干燥箱:采用具有超溫偏保護、數字顯示的微電腦P.I.D溫度控制器,熱風循環系統由能在高溫下連續動轉的風機和合適風道組成,立限溫報警系統,超過限制溫度即自動中斷,保證實驗安全運行不發生意外;

1.1.4、濾器:用于大多數培養用液,如人工合成培養基、血清、酶液等采用濾過法除菌。

1.1.5、紫外燈:主要用于培養室空氣、操作臺、塑料培養皿和培養板等表面消毒;

1.1.6、水:新鮮配置的三蒸水或去離子水;

1.1.7、平衡鹽溶液:采用無Ca2+、Mg2+的緩沖液;

1.2、所述口腔粘膜細胞的準備是在無菌條件下收集日常領面外科手術中丟棄的多余粘膜,患者年齡3~60歲,置于體積分數為10%血清的DMEM中,PBS洗凈血跡,2.5g/L洗必泰液浸泡5~8min,盡量去除粘膜下組織,并切成0.3cmx1cm大小的組織塊;

所述具體的培養過程指每個標本分成相等兩份,其中一份放入2.5g/L Dispase2溶液且在4C冰箱過夜;另一份則置2.5g/L胰酶4C冰箱過夜,兩組分離時間相同,然后用眼科鑷將表皮撕下,將兩組的上皮分別用2.5g/L胰酶37C消化5-10min,DMEM(含血清)中止消化,吹打成單細胞液,血球板計算細胞數,臺盼蘭活細胞計數,以4x10*個/cm的細胞密度接種于含K1-SFM的25ml培養瓶中,其中Dispase2消化液經K-SFM配置,K-SFM作為培養基,可獲得較純凈的OMECS顯示上皮細胞特征。

2.根據權利要求1所述的一種口腔粘膜細胞培養方法,其特征在于,所述培養后的結束工作是將實驗中接觸到的所有器皿在醫用酒精的清理后,分布放入壓力蒸汽消毒器中和紫外燈下,完成全面立體的消毒,再放入電熱干燥箱中,完成培養后的結束工作。

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