[發明專利]一種制備西他列汀的工程化轉氨酶多肽有效
| 申請號： | 201910493876.7 | 申請日： | 2019-06-07 |
| 公開（公告）號： | CN112048485B | 公開（公告）日： | 2022-09-27 |
| 發明（設計）人： | 陳海濱;羅霄;蔡寶琴;尚傳洋;孫磊;馬可·博科拉;胡東曉;王子坤;俞嘉薇 | 申請（專利權）人： | 寧波酶賽生物工程有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P17/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 315000 浙江省寧波市世紀大道*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 制備 工程 轉氨酶 多肽 | ||
1.一種工程化轉氨酶多肽，該轉氨酶多肽可在合適的反應條件下、在氨基供體存在時，能夠將結構式A-1化合物：3-羰基-1-[3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪-7-基]-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮，轉化為結構式A-2化合物：(3R)-3-氨基-1-[3-(三氟甲基)-5,6,7,8-四氫-1,2,4-三唑并[4,3-a]吡嗪-7-基]-4-(2,4,5-三氟苯基)丁-1-酮，其中所述的轉氨酶多肽是選自由以下組成的組的序列：SEQ ID No:4、6、8、
10、12所示的氨基酸序列
2.如權利要求1所述的轉氨酶多肽，其中所述合適的反應條件包括2g/L-100g/L底物A-1，0.5M-2.0M異丙胺，50μM-5mM PLP，pH7.0-11.0，10％-40％(v/v)甲醇，10-60℃。
3.一種通過化學鍵或物理吸附的方法被固定在固體材質上的多肽，所述多肽選自權利要求1-2任一項所述的轉氨酶多肽。
4.一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼權利要求1-3任一項的多肽。
5.如權利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸序列為對應SEQ ID No：3、5、7、9、11的序列。
6.一種表達載體，所述表達載體包含權利要求4-5所述的多核苷酸。
7.如權利要求6所述的表達載體，所述表達載體包括質粒、粘粒、噬菌體或病毒載體。
8.一種宿主細胞，所述宿主細胞包括權利要求6-7任一項的表達載體，所述宿主細胞為大腸桿菌(E.coli)。
9.一種轉氨酶多肽的制備方法，其包括如下步驟：培養權利要求8所述的宿主細胞，以及從培養物中獲得轉氨酶多肽。
10.一種轉氨酶催化劑，其由權利要求9所述的方法制備，通過從培養物中獲得的含轉氨酶多肽的宿主細胞或培養液，或者用其加工的制品；其中，所述制品是指由轉化體細胞得到的提取物，通過對提取物中的轉氨酶進行分離或純化得到的分離產品，或通過固定化轉化體細胞及其提取物或提取物的分離產品而得到的固定化制品。
11.一種制備結構式A-2化合物的方法：
所述方法包括在適于轉化式A-1化合物為式A-2化合物的反應條件下，在氨基供體存在下，將結構式A-1化合物
與權利要求1-3任一項的工程化轉氨酶多肽接觸的步驟。
12.如權利要求11所述的方法，其中所述手性胺產物A-2以至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更大的對映體過量產生。
13.如權利要求11-12任一項所述的方法，其中所述反應溶劑包括水，甲醇，乙醇，丙醇，異丙醇，乙酸異丙酯，二甲基亞砜(DMSO)或二甲基甲酰胺(DMF)。
14.如權利要求11-13任一項所述的方法，其中所述反應條件包括10℃至60℃的溫度。
15.如權利要求11-14任一項所述的方法，其中所述反應條件包括pH7.0至pH11.0。
16.如權利要求11-15任一項所述的方法，其中所述A-1底物以2g/L至100g/L的載量存在。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于寧波酶賽生物工程有限公司，未經寧波酶賽生物工程有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.17sss.com.cn/pat/books/201910493876.7/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
