1.一種小鼠門靜脈周肝細(xì)胞和中央靜脈周肝細(xì)胞的分離方法，包括下述步驟：

（1）小鼠門靜脈周肝細(xì)胞的分離

1)離體灌注機(jī)的速度調(diào)至30-40 rpm/min，將一次性靜脈采血針一端和離體灌注機(jī)相連，另一端從小鼠肝臟門靜脈插入；

2)門靜脈周肝細(xì)胞分離灌注：打開機(jī)器，立即剪斷下腔靜脈，并把離體灌注機(jī)的速度調(diào)至50-60rpm/min，用36-38℃沖洗液從門靜脈進(jìn)行灌注，持續(xù)灌注直到下腔靜脈處流出的液體顏色澄清；

3)離體灌注機(jī)設(shè)置為逆流模式，速度為10-15rpm/min，然后使用注射器將損傷劑從下腔靜脈處注射進(jìn)去，直到肝臟表面出現(xiàn)均勻白色小點(diǎn)，立即將離體灌注機(jī)設(shè)置為正流模式，速度為40-50rpm/min；

4)繼續(xù)灌注20-30mL的沖洗液后，開始灌注36-38℃消化液，速度為40-45rpm/min，直到肝臟膨大并在出現(xiàn)膨大現(xiàn)象后3min之內(nèi)塌陷下去，此為消化完成；

（2）小鼠中央靜脈周肝細(xì)胞的分離

1)離體灌注機(jī)的速度調(diào)至30-40rpm/min，將一次性靜脈采血針一端和離體灌注機(jī)相連，另一端從小鼠肝臟下腔靜脈插入；

2)中央靜脈周肝細(xì)胞分離灌注：打開機(jī)器，立即剪斷門靜脈，將離體灌注機(jī)的速度調(diào)至50-60rpm/min，用36-38℃的沖洗液從下腔靜脈進(jìn)行灌注，持續(xù)灌注直到門靜脈處流出的液體顏色澄清；

3)離體灌注機(jī)設(shè)置為逆流模式，速度為10-15rpm/min，然后使用注射器將損傷劑從門靜脈處注射進(jìn)去，直到肝臟表面出現(xiàn)均勻白色小點(diǎn)，立即將離體灌注機(jī)設(shè)置為正流模式，速度為40-50rpm/min；

4)繼續(xù)灌注20-30mL的沖洗液后，開始灌注37℃的消化液，速度為40-45rpm/min，直到肝臟膨大并在出現(xiàn)膨大現(xiàn)象后3min之內(nèi)塌陷下去，此為消化完成；

所述消化液配方：使用DMEM將10*HBSS稀釋成含有1*HBSS的溶液，加入Ⅳ膠原酶溶液使膠原酶的終濃度為0.5-0.6mg/mL；

所述沖洗液配方：PBS中加入EGTA，使其終濃度為5-5.5mM；

所述損傷劑配方：洋地黃皂苷溶解于滅菌超純水中，使其終濃度為5-5.5mM；

（3）小鼠門靜脈周肝細(xì)胞和小鼠中央靜脈周肝細(xì)胞單細(xì)胞懸液的獲得

將步驟（1）和（2）消化后的細(xì)胞懸液分別過(guò)60-70μm細(xì)胞篩，得小鼠門靜脈周肝細(xì)胞和小鼠中央靜脈周肝細(xì)胞的單細(xì)胞懸液，分別離心后重懸，即得。