[發明專利]可在腸道中催化尿酸降解的組合物及其制備方法和應用有效
| 申請號: | 201910095135.3 | 申請日: | 2019-01-31 |
| 公開(公告)號: | CN109846909B | 公開(公告)日: | 2022-03-22 |
| 發明(設計)人: | 劉海峰;劉艷紅;陳火晴;劉紅;黃荷 | 申請(專利權)人: | 武漢康復得生物科技股份有限公司 |
| 主分類號: | A61K36/068 | 分類號: | A61K36/068;A61K38/44;A61P19/06;A61P13/04;A61P13/12;A23L33/00;A23L31/00 |
| 代理公司: | 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228 | 代理人: | 張濤 |
| 地址: | 430050 湖北省武漢市東湖*** | 國省代碼: | 湖北;42 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 腸道 催化 尿酸 降解 組合 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種可在腸道中催化尿酸降解的組合物,其特征在于,所述組合物含有蛹蟲草菌粉或干酶粉,所述蛹蟲草菌粉或干酶粉包含可催化尿酸降解的尿酸氧化酶;
所述含尿酸氧化酶的蛹蟲草菌粉通過以下步驟制得:
1)將保存于PDA固體培養基上的蛹蟲草菌Cordyceps militaris挑取菌絲轉接到真菌培養基平板,25-28℃培養6-10天進行活化培養,從平板上切取1cm×1cm的菌塊,切碎后,接種至液體種子培養基,置于150-170rpm,25-28℃培養箱中培養3-5天,然后用無菌手持式勻漿機將菌塊打碎,繼續在相同條件下培養3-5天,再次用無菌手持式勻漿機將菌塊打碎,然后再按2-15%(v/v)的接種量接入種子液培養基中,150-170rpm、25-28℃培養3-5d,制備成種子液;
2)將種子液以5-20%(v/v)的接種量接入發酵培養基中,發酵罐裝液比為0.6-0.8,培養基起始pH值為6.5,在25-28℃條件下連續培養,發酵過程中溶氧控制在30-70%,從第2天起,流加誘導劑至終濃度0.01-0.1wt%后進行誘導產酶,調節并維持pH值在7.0-8.5,持續培養7-10天,發酵培養物經板框過濾除去發酵清液,收集發酵菌絲體;
3)將步驟2)收集的發酵菌絲體經純水洗滌3-5遍后,再次經板框過濾收集菌絲體,菌絲體在50-60℃條件下真空干燥箱干燥后,經機械粉碎為40-80目的粗菌粉,再經氣流粉碎為150-300目的超細粉,即得所述含尿酸氧化酶的蛹蟲草菌粉;
所述含蛹蟲草尿酸氧化酶的干酶粉通過以下步驟制得:
1)將保存于PDA固體培養基上的蛹蟲草菌Cordyceps militaris挑取菌絲轉接到真菌培養基平板,25-28℃培養6-10天進行活化培養,從平板上切取1cm×1cm的菌塊,切碎后,接種至液體種子培養基,置于150-170rpm,25-28℃培養箱中培養3-5天,然后用無菌手持式勻漿機將菌塊打碎,繼續在相同條件下培養3-5天,再次用無菌手持式勻漿機將菌塊打碎,然后再按2-15%(v/v)的接種量接入種子液培養基中,150-170rpm、25-28℃培養3-5d,制備成種子液;
2)將種子液以5-20%(v/v)的接種量接入發酵培養基中,發酵罐裝液比為0.6-0.8,培養基起始pH值為6.5,在25-28℃條件下連續培養,發酵過程溶氧控制在30-70%,從第2天起,流加誘導劑至終濃度0.01-0.1wt%后進行誘導產酶,調節并維持pH值在7.0-8.5,持續培養7-10天,發酵培養物經板框過濾除去發酵清液,收集發酵菌絲體;
3)將步驟2)收集的發酵菌絲體經純水洗滌3-5遍后,加入3-5倍菌絲體體積的純水,經機械乳化罐乳化打碎,乳化液經離心機8000-12000rpm離心,收集上清液,即為含蛹蟲草尿酸氧化酶的粗提酶液,酶液經純化或者未經純化后,加入蛋白保護劑經噴霧干燥或者冷凍干燥,即得所述含蛹蟲草尿酸氧化酶的干酶粉;
其中,所述誘導劑為尿酸、黃嘌呤、次黃嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、硫代黃嘌呤或氨基尿嘧啶中的一種或幾種。
2.如權利要求1所述的可在腸道中催化尿酸降解的組合物,其特征在于,當所述組合物含有蛹蟲草菌粉時,所述蛹蟲草菌粉包含的可催化尿酸降解的尿酸氧化酶的活力為0.23U/g-292U/g。
3.如權利要求1所述的可在腸道中催化尿酸降解的組合物,其特征在于,當所述組合物含有干酶粉時,所述干酶粉包含的可催化尿酸降解的尿酸氧化酶的活力為2U/mg-20U/mg。
4.如權利要求1所述的可在腸道中催化尿酸降解的組合物,其特征在于,所述種子培養基與發酵培養基的配方相同,其組分如下:蔗糖2.0wt%-5.0wt%,蛋白胨2.0wt%-3.0wt%,酵母膏1.0wt%-2.5wt%,磷酸氫二鉀0.5wt%-1.5wt%,磷酸二氫鈉1.0wt%-2.0wt%,余量為水,pH6.5;所述板框過濾的濾布孔徑200-300目;所述蛋白保護劑包含海藻糖、乳糖或牛血清白蛋白。
5.權利要求1-4任一項所述的可在腸道中催化尿酸降解的組合物在制備用于預防和治療尿酸腎結石、高尿酸血癥或痛風的產品中的應用。
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