[發明專利]一種脂蛋白(a)的測定試劑盒有效
| 申請號： | 201910070613.5 | 申請日： | 2019-01-25 |
| 公開（公告）號： | CN109541241B | 公開（公告）日： | 2019-09-20 |
| 發明（設計）人： | 陳青松;余法建 | 申請（專利權）人： | 浙江夸克生物科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N33/92 | 分類號： | G01N33/92;G01N33/543;G01N33/544;G01N33/531 |
| 代理公司： | 北京精金石知識產權代理有限公司 11470 | 代理人： | 宋秀蘭 |
| 地址： | 312500 浙江省紹興市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 三羥甲基氨基甲烷 表面活性劑 測定試劑盒 生物防腐劑 試劑盒 脂蛋白 氯化鈉 全自動生化分析儀 膠乳免疫比濁法 生物檢測技術 檢測靈敏度 硫酸葡聚糖 準確度 混合粒徑 甲基甲苯 膠乳試劑 經濟成本 聚乙二醇 抗體膠乳 人脂蛋白 甘氨酸 校準品 質控品 檢測 丁基 羊抗 樣本 存儲 醫學 | ||
1.一種脂蛋白(a)的測定試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包括：試劑R1、試劑R2、校準品和質控品；
所述的試劑R1包括：三羥甲基氨基甲烷0.01mol/L、氯化鈉9g/L、聚乙二醇-6000 40g/L、生物防腐劑0.5g/L和表面活性劑1mL/L；
所述的試劑R2包括：三羥甲基氨基甲烷0.01mol/L、羊抗人脂蛋白(a)抗體膠乳顆粒220mL/L、二丁基甲基甲苯1.3g/L、甘氨酸4g/L、硫酸葡聚糖8g/L、生物防腐劑0.5g/L和表面活性劑1mL/L；
所述的生物防腐劑為NaN3；
所述的表面活性劑為曲拉通X-100；
所述的校準品包括：脂蛋白(a)、氯化鈉9g/L、聚乙二醇-6000 40g/L、硫酸葡聚糖8g/L、生物防腐劑0.5g/L和表面活性劑1mL/L；
所述的質控品包括：脂蛋白(a)200mg/L、氯化鈉9g/L、聚乙二醇-6000 40g/L、硫酸葡聚糖8g/L、生物防腐劑0.5g/L和表面活性劑1mL/L；
所述的羊抗人脂蛋白(a)抗體膠乳顆粒是羊抗人脂蛋白(a)抗體包被的聚甲基丙烯酸甲酯膠乳顆粒，羊抗人脂蛋白(a)抗體與聚甲基丙烯酸甲酯膠乳的體積比為1:2；
所述的聚甲基丙烯酸甲酯膠乳是粒徑為60-100nm的聚甲基丙烯酸甲酯膠乳和粒徑為100-200nm的聚甲基丙烯酸甲酯膠乳混合而成，60-100nm的聚甲基丙烯酸甲酯膠乳與粒徑為100-200nm的聚甲基丙烯酸甲酯膠乳的質量比為1:2；
所述的羊抗人脂蛋白(a)抗體膠乳顆粒的制備方法，包括以下步驟：
(1)制備羊抗人脂蛋白(a)抗體溶液：取羊抗人脂蛋白(a)抗體溶于Tris-HCl緩沖液中，pH為7.2，制得濃度為1.0mL/mL的羊抗人脂蛋白(a)抗體溶液；
(2)制備膠乳微球懸浮液：取聚甲基丙烯酸甲酯膠乳顆粒溶解于Tris-HCl緩沖液中，濃度為1％(w/v)，加入聚天冬氨酸和N,N-亞甲基雙丙烯酰胺，孵育，離心，棄上清，用Tris-HCl緩沖液洗滌膠乳微球兩次，加入Tris-HCl緩沖液，震蕩重懸，制得濃度為1％(w/v)的膠乳微球懸浮液；
(3)制備羊抗人脂蛋白(a)抗體膠乳顆粒：將步驟(1)得到的羊抗人脂蛋白(a)抗體溶液和步驟(2)得到的膠乳微球懸浮液混均，孵育，加入2-羥基乙胺混勻，封閉，離心，棄上清，用Tris-HCl緩沖液洗滌兩次，加入Tris-HCl緩沖液，震蕩重懸，制得濃度為220mL/L的羊抗人脂蛋白(a)抗體膠乳顆粒。
2.根據權利要求1所述的測定試劑盒，其特征在于，所述的校準品包括脂蛋白(a)的含量分別為0mg/L，10mg/L，50mg/L，100mg/L，200mg/L和300mg/L的六個濃度梯度標準品。
3.一種非診斷性目的的脂蛋白(a)的檢測方法，其特征在于，所述的檢測方法是利用權利要求1-2任意一項所述的測定試劑盒檢測人血清中脂蛋白(a)的含量。
4.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述的檢測方法包括以下步驟：
(1)繪制標準曲線：利用校準品進行多點校準，以校準品的吸光度變化值ΔA＝A標準-A空白為縱坐標，其相應濃度C標準為橫坐標繪制標準曲線；
(2)檢測待測樣本：將人血清樣本和試劑R1混均，37℃溫育5min，加入試劑R2混勻，靜置30s，在600nm的波長下檢測吸光度A1，37℃恒溫反應5min，結束反應，在600nm的波長下檢測吸光度A2，根據步驟(1)繪制的標準曲線，利用吸光度變化值ΔA＝A2-A1計算人血清樣本中的脂蛋白(a)的濃度；
(3)質量控制：用質控品監測操作程序，重復測定，計算相對偏差，相對偏差不超過±15％；
所述的人血清樣本、試劑R1和試劑R2的體積比為2:245:33-38；
所述的人血清樣本為人的不溶血空腹血清。
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