本發(fā)明屬于水產(chǎn)生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用于中華鱉遺傳性別鑒定的分子標(biāo)記及方法，采用RAD技術(shù)對中華鱉雌雄個體進(jìn)行測序，篩選雌雄特異性片段；根據(jù)雌雄特異性片段進(jìn)行雌性基因組Walking，獲得6532bp的特異性片段SEQ ID NO：1；基于特異性片段設(shè)計引物，進(jìn)行引物篩選和驗證獲得特異性引物；采集中華鱉裙邊組織，提取中華鱉基因組DNA，利用引物對在中華鱉個體中進(jìn)行擴增；擴增結(jié)果進(jìn)行電泳檢測；進(jìn)行遺傳性別的鑒定。本發(fā)明解決了目前尚未見到中華鱉性別特異性標(biāo)記用于遺傳性別的鑒定，具有原創(chuàng)性。本發(fā)明準(zhǔn)確鑒定成功率達(dá)到100％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于中華鱉遺傳性別鑒定的分子標(biāo)記及方法。

背景技術(shù)

目前，業(yè)內(nèi)常用的現(xiàn)有技術(shù)是這樣的：

中華鱉(Pelodiscus sinensis)屬爬行綱、龜鱉目、鱉科、鱉屬，俗稱甲魚、水魚、團魚。在世界范圍內(nèi)，鱉主要分布于亞洲、非洲及北美，在亞洲主要分布于中國、俄羅斯東部、朝鮮、日本和越南。在我國分布范圍廣泛，除西藏、青海及新疆外各省市、自治區(qū)均有分布。由于其具有較高的營養(yǎng)價值和藥用價值，一直以來深受廣大消費者的喜愛。近些年來，中華鱉養(yǎng)殖業(yè)也得到較快發(fā)展，養(yǎng)殖產(chǎn)量在2016年已經(jīng)達(dá)到34.5萬噸。中華鱉呈現(xiàn)明顯的雌雄異速生長，雄性生長速度快于雌性，且雄性的裙邊寬厚，雄性苗種的價格較雌性高，雄性苗種深受廣大養(yǎng)殖企業(yè)和養(yǎng)殖戶的歡迎。因此，全雄或高雄性中華鱉苗種的培育將極大地提高養(yǎng)殖產(chǎn)量，增加養(yǎng)殖效益，中華鱉的性別控制育種也業(yè)已成為重要的研究課題。

目前中華鱉單性苗種生產(chǎn)常用的方法是人工挑選。孵化后的苗種經(jīng)人工養(yǎng)殖一段時間，在出現(xiàn)明顯異形特征時通過外部形態(tài)進(jìn)行判別，目前通常以尾的長短作為第一辨別特征，雌性個體尾短，尾端不或很少自然伸出裙邊外；雄性個體尾長，能夠自然伸出裙邊。雖然人工挑選的方法簡單易行，但是對于尾部特征不明顯的個體或者幼鱉鑒定效果較差，同時還必須在養(yǎng)殖到出現(xiàn)明顯的外形判別特征時才能進(jìn)行，需要將雌雄性苗種同時養(yǎng)殖一段時間，一般在溫室養(yǎng)殖情況下需要3-4個月，在外塘養(yǎng)殖時間更長，而規(guī)格苗種出售時，通常養(yǎng)殖企業(yè)和養(yǎng)殖戶只購買雄性苗種，絕大部分雌性個體只能作為商品鱉銷售，而價格相對較低，直接影響了中華鱉苗種養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益。

采用激素誘導(dǎo)性逆轉(zhuǎn)和遺傳學(xué)相結(jié)合的方法是中華鱉單性苗種生產(chǎn)的另外一條途徑，也是目前研究的重點方向。該方法研究的基礎(chǔ)是必須獲得性逆轉(zhuǎn)個體，進(jìn)而準(zhǔn)確鑒定出性逆轉(zhuǎn)個體，也就是準(zhǔn)確鑒定出生理性別和遺傳性別不一致的個體。中華鱉遺傳性別的鑒定對于開展中華鱉性別誘導(dǎo)、性別控制技術(shù)研究、中華鱉育種方案的制定和育種計劃的有效管理具有重要的作用。因此發(fā)明一種可以用于中華鱉遺傳性別鑒定的方法尤其必要。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)存在的問題是：

(1)通常在生產(chǎn)實踐中，現(xiàn)有常規(guī)技術(shù)主要是通過對中華鱉外形特征進(jìn)行生理性別的鑒定，但是對于規(guī)格較小或外形特征不明顯的中華鱉苗種，難以準(zhǔn)確鑒定，鑒定效果不佳。

(2)在科研工作中，也可以通過組織切片等方式對中華鱉的生理性別進(jìn)行鑒定，但是需要解剖采集性腺組織，造成中華鱉的死亡。

(3)在未發(fā)生性逆轉(zhuǎn)，遺傳性別與生理性別一致，通過生理性別可以間接鑒定遺傳性別；但是如果是性逆轉(zhuǎn)個體，遺傳性別與生理性別不一致，無法通過生理性別的鑒定得到其遺傳性別。

(3)在進(jìn)行中華鱉性別控制研究時，中華鱉群體可能同時存在性逆轉(zhuǎn)個體和未性逆轉(zhuǎn)個體，外形鑒定和組織切片鑒定均無法獲得真正的遺傳性別。

解決上述技術(shù)問題的難度：

可以通過開發(fā)準(zhǔn)確高效的性別特異性分子標(biāo)記準(zhǔn)確地中華鱉遺傳性別，目前雖然性別特異性標(biāo)記開發(fā)的技術(shù)方法很多，一些技術(shù)方法也均可以實現(xiàn)，不存在顯著的技術(shù)障礙，但是在分子標(biāo)記開發(fā)的過程中存在很大的不確定性，與使用的中華鱉群體、篩選分子標(biāo)記的類型、采用分析方法、參數(shù)閾值的設(shè)置等都有密切的關(guān)系。

解決上述技術(shù)問題的意義：