[發明專利]一種三疣梭子蟹WNT4基因及其應用在審
| 申請號： | 201910059641.7 | 申請日： | 2019-01-22 |
| 公開（公告）號： | CN110330555A | 公開（公告）日： | 2019-10-15 |
| 發明（設計）人： | 付媛媛;劉磊;王春琳;朱芳 | 申請（專利權）人： | 寧波大學 |
| 主分類號： | C07K14/435 | 分類號： | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 寧波誠源專利事務所有限公司 33102 | 代理人： | 張一平;葉桂萍 |
| 地址： | 315211 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 三疣梭子蟹 表達產物 宿主細胞 基因 基因重組蛋白 重組表達載體 表達載體 分離純化 分子機制 基因工程 基因基因 基因重組 細胞反應 細胞命運 下游效應 誘導表達 重組蛋白 附肢 構建 增殖 制備 應用 分化 再生 | ||
1.一種三疣梭子蟹WNT4基因，其特征在于：該三疣梭子蟹WNT4基因為PtWNT4，所述PtWNT4的核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
2.根據權利要求1所述的三疣梭子蟹WNT4基因，其特征在于所述的PtWNT4的氨基酸序列為：
MetGlnSerSerAlaGluLeuGluProHisArgTyrArgGluGluCysAsnAsnLeuThrTyrLeuValAlaLysGlnLysGlnLeuCysArgLeuSerGlnAsnValLeuLysThrValSerGlnGlyAlaArgMetGlyIleSerGlnCysGlnHisGlnPheSerMetHisArgTrpAsnCysSerThrPheSerAspSerProTyrValPheGlyHisLeuLeuArgIleLysSerArgGluLysAlaTyrValTyrAlaIleSerAlaAlaGlyValAlaTyrSerValThrArgAlaCysSerArgGlyGluLeuThrGluCysGlyCysAspGluArgIleArgGlnArgProThrArgGlyArgTrpValTrpGlyGlyCysSerGluAspLeuArgPheGlyGluTyrPheSerLysGluPheValAspAlaArgGluAlaArgAsnThrAlaGluGlyLeuMetAsnLeuHisAsnAsnGluAlaGlyArgArgAlaIleArgSerGluMetGluLeuValCysLysCysHisGlyValSerGlySerCysSerMetArgValCysTrpArgArgMetGlyAlaPheThrAsnIleGlyAspSerIleLeuGlnArgPheGluGlyAlaSerIleValArgPheValLysLysArgLysArgLysLysLeuArgProLeuLysArgGlyPheLysArgProThrArgArgAspLeuValTyrLeuGluGluSerProAspTyrCysThrArgAsnGluAspLeuGlyValLeuGlyThrThrGlyArgLeuCysAsnLysThrAsnTrpGlyMetAspGlyCysArgLeuLeuCysCysGlyArgGlyTyrGlnThrMetValLysGluValThrGluLysCysAsnCysArgPheValTrpCysCysLysValHisCysGluLysCysGlnValSerArgGluGluHisTyrCysAsn 。
3.根據權利要求2所述的三疣梭子蟹WNT4基因，其特征在于所述的PtWNT4的特異性引物對的序列分別為SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，其中
上游引物的核苷酸序列SEQ ID NO.2為：5'CGGAATTCATGAAGAGGGTGCGGCCC3'；
下游引物的核苷酸序列SEQ ID NO.3為：5'CGCTCGAGGTTACAATAATGTTCCTCACG3'。
4.一種制備如權利要求1～3任意一項所述的三疣梭子蟹WNT4基因的重組蛋白的方法，其特征在于包括以下步驟：
(1)構建三疣梭子蟹WNT4基因重組表達載體；
(2)將步驟(1)所得重組表達載體導入宿主細胞，并將宿主細胞進行誘導表達，獲得表達產物；
(3)將分離純化步驟(2)所得的表達產物，獲得重組蛋白，即三疣梭子蟹WNT4基因重組蛋白。
5.根據權利要求4所述的三疣梭子蟹WNT4基因重組蛋白的制備方法，其特征在于在所述步驟(1)中的表達載體選用pET28a(+)。
6.根據權利要求4所述的三疣梭子蟹WNT4基因重組蛋白的制備方法，其特征在于在所述步驟(2)中，所述宿主細胞為大腸桿菌TOP10F'。
7.一種根據權利要求1～6任意一項所述的三疣梭子蟹WNT4基因在細胞WNT信號通路的應用。
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