本發(fā)明屬于豬偽狂犬病病毒技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)一種豬偽狂犬病病毒變異株HN?QYY、HN?QYY?gE^?及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。豬偽狂犬病病毒變異株HN?QYY，保藏編號(hào)：CGMCC No.15192。豬偽狂犬病病毒變異株HN?QYY?gE^?，保藏編號(hào)：CGMCC No.15200。所述豬偽狂犬病病毒變異株HN?QYY?gE^?在制備豬偽狂犬病滅活疫苗中的應(yīng)用。本發(fā)明豬偽狂犬病病毒變異株HN?QYY為當(dāng)前的流行毒株，能夠有效預(yù)防豬偽狂犬病的發(fā)生；本發(fā)明豬偽狂犬病病毒變異株HN?QYY?gE^?缺失了gE基因，能夠在后期的抗體檢測(cè)中有效地區(qū)分野毒和疫苗毒，為豬偽狂犬病的預(yù)防和凈化提供了有效的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于豬偽狂犬病病毒技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬偽狂犬病病毒變異株HN-QYY、HN-QYY-gE^-及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

豬偽狂犬病是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的豬的急性、高度接觸性傳染病。該病呈暴發(fā)性流行，可引起妊娠母豬流產(chǎn)、死胎，公豬不育，新生仔豬大量死亡，育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等，是危害全球養(yǎng)豬業(yè)的重大傳染病之一。PRV可感染多種動(dòng)物，比如犬、貓、狐和水貂等，豬、牛、羊等家畜感染此病，可造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。豬是偽狂犬病毒的貯存宿主，并且病毒可以潛伏感染在豬體內(nèi)，嚴(yán)重威脅我國(guó)和世界養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。但是，從2011年開(kāi)始，PRV在我國(guó)的幾個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)暴發(fā)，而且發(fā)病程度極其嚴(yán)重，并迅速擴(kuò)大到了河南、河北等北方省市。被感染的動(dòng)物臨床癥狀復(fù)雜，包括高燒、厭食、咳嗽、發(fā)抖、腹瀉和全身性神經(jīng)癥狀。感染的豬憔悴，外表薄弱，最終死亡。令人感到意外的是，育肥豬也在這個(gè)疫情期間發(fā)生死亡，死亡率大約為10%到30%。通過(guò)對(duì)9個(gè)省20個(gè)豬場(chǎng)采的540分血清進(jìn)行了偽狂犬野毒的抗體水平檢測(cè)，陽(yáng)性率達(dá)52%，而河南省的某些豬場(chǎng)PRV陽(yáng)性率甚至達(dá)到了94%，通過(guò)臨床試驗(yàn)證明，傳統(tǒng)的PRV疫苗不能夠?qū)ΜF(xiàn)行的毒株產(chǎn)生有效的保護(hù)。因此，豬偽狂犬病的暴發(fā)證明傳統(tǒng)的PRV疫苗并不適合當(dāng)下流行的偽狂犬病，需要進(jìn)一步研究其致病機(jī)理和開(kāi)發(fā)更為有效的疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種豬偽狂犬病病毒變異株HN-QYY、HN-QYY-gE^-及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

一種豬偽狂犬病病毒變異株HN-QYY，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏日期：2017年12月22日，保藏編號(hào)：CGMCC No.15192。

一種豬偽狂犬病病毒變異株HN-QYY-gE^-，保藏單位：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏日期：2018年01月02日，保藏編號(hào)：CGMCC No.15200。

所述豬偽狂犬病病毒變異株HN-QYY-gE^-的構(gòu)建方法，步驟如下：

（1）、將保藏編號(hào)為CGMCC No.15192的變異株HN-QYY接種至長(zhǎng)滿單層的vero細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)80%以上病變的時(shí)候，收獲病毒液，反復(fù)凍融，離心，取上清，酚氯仿方法提取變異株HN-QYY病毒基因組DNA，保存?zhèn)溆茫?/p>

（2）、以變異株HN-QYY病毒基因組DNA為模板，利用引物gEL-f/gEL-r和gER-f/gER-r分別PCR擴(kuò)增gE基因上下游同源臂gEL和gER，瓊脂糖凝膠電泳鑒定后純化PCR產(chǎn)物，測(cè)定DNA含量，保存?zhèn)溆茫?/p>

其中，引物序列分別為：

gEL-f：如SEQ ID No.1所示；gEL-r：如SEQ ID No.2所示；

gER-f：如SEQ ID No.3所示；gER-r：如SEQ ID No.4所示；