[發明專利]一種利用ISSR體系分析玉米螟種群遺傳多樣性的方法有效
| 申請號： | 201811573166.7 | 申請日： | 2018-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN109576377B | 公開（公告）日： | 2022-03-15 |
| 發明（設計）人： | 王振;宋顯東;楊峰山;張齊鳳;李鵬;司兆勝 | 申請（專利權）人： | 黑龍江省植檢植保站 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109 | 代理人： | 岳泉清 |
| 地址： | 150090 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 利用 issr 體系 分析 玉米螟 種群 遺傳 多樣性 方法 | ||
1.一種用于亞洲玉米螟種群遺傳多樣性分析的ISSR-PCR反應體系，其特征在于，每25μL的反應體系中含有模板 1μL，Taq酶 0.125μL，Buffer 2.5μL，dNTP 2μL，引物 1μL，ddH2O18.375μL；將上述反應體系按如下程序進行擴增：94℃ 預變性 5min，94℃變性45s，40~61℃退火1.5min，72℃延伸1.5min，共40個循環，最后72℃延伸10min，4℃保存；所述的引物序列如下所示：
引物807：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：1所示，退火溫度54℃；
引物810：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：2所示，退火溫度51.8℃；
引物818：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：3所示，退火溫度53.4℃；
引物825：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：4所示，退火溫度53.0℃；
引物826：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：5所示，退火溫度50.1℃；
引物835：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：6所示，退火溫度59.0℃；
引物836：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：7所示，退火溫度54.2℃；
引物847：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：8所示，退火溫度54.2℃；
引物848：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：9所示，退火溫度54.2℃；
引物849：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：10所示，退火溫度56.9℃；
引物855：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：11所示，退火溫度52.1℃；
引物878：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：12所示，退火溫度50.4℃；
引物880：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：13所示，退火溫度50.4℃；
引物890：其核苷酸序列如序列表Seq ID No：14所示，退火溫度52.8℃。
2.如權利要求1所述的ISSR-PCR反應體系分析亞洲玉米螟種群遺傳多樣性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
一、亞洲玉米螟基因組DNA的提?。?/p>
二、采用權利要求1所述ISSR-PCR反應體系對步驟一提取的DNA樣品進行擴增；
三、對步驟二擴增后的PCR產物進行電泳，顯色，顯色后，拍照獲取電泳條帶信息并保存；
四、將得到的電泳圖進行分析，統計各樣本遷移位置條帶有無，相同位置有條帶的記為“1”，無條帶的記為“0”，建立二元數據矩陣；通過軟件獲得各亞洲玉米螟種群相似系數矩陣，對玉米螟種群進行聚類分析并制作聚類圖。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，PCR 產物用 2.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測并用凝膠成像系統拍照保存，得到的電泳圖用 Quantity One分析軟件分析，統計各樣本遷移位置條帶有無，相同位置有條帶的記為“1”，無條帶的記為“0”，建立二元數據矩陣。
4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，二元數據用POPGEN32分析，得到各亞洲玉米螟種群相似系數矩陣，利用 UPGMA 法對22個亞洲玉米螟種群進行聚類分析并制作聚類圖。
5.權利要求1所述的ISSR-PCR反應體系的應用，其特征在于，在輔助鑒定亞洲玉米螟不同地理種群的遺傳結構及親緣關系中的應用。
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