本發(fā)明提供了一種細(xì)菌總數(shù)的快速檢測方法，屬于細(xì)菌總數(shù)檢測方法技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的快速檢測方法，包括以下步驟：待測樣本液和體細(xì)胞ATP釋放劑反應(yīng)，再添加ATP發(fā)光試劑反應(yīng)，再添加細(xì)菌ATP釋放劑反應(yīng)；熒光檢測儀檢測所得反應(yīng)液；將得到的熒光數(shù)據(jù)代入換算公式a中計算，得到待測樣本液中細(xì)菌數(shù)量。采用體細(xì)胞ATP釋放劑和ATP發(fā)光試劑分步添加消耗待測樣品中體細(xì)胞中ATP和游離ATP后，再在細(xì)菌ATP釋放劑作用下使細(xì)菌ATP釋放，實現(xiàn)僅檢測細(xì)菌ATP產(chǎn)生的熒光信號的目的。本檢測方法實現(xiàn)利用ATP檢測儀準(zhǔn)確對細(xì)菌計數(shù)的目的，還具有檢測靈敏度高、檢測時間短的特點，應(yīng)用范圍廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)菌總數(shù)檢測方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種細(xì)菌總數(shù)的快速檢測方法。

背景技術(shù)

細(xì)菌計數(shù)是應(yīng)用范圍較廣的研究手段，例如水體中細(xì)菌的分布是檢測水體受污染程度的一個重要指標(biāo)，而研究細(xì)菌的分布是檢測水體中受污染程度的一個重要指標(biāo)，而研究細(xì)菌分布情況最重要的是對細(xì)菌數(shù)量的準(zhǔn)確測定，這對環(huán)境評價以及實際工程應(yīng)用具有重要意義。再例如，篩查尿路是否發(fā)生感染時需對尿液中細(xì)菌數(shù)量做檢測，由此可知，細(xì)菌計數(shù)在篩查尿路感染中具有臨床意義。因此，提供一種簡便快速的細(xì)胞總數(shù)的檢測方法具有重要意義。

目前，細(xì)菌計數(shù)的方法主要包括計數(shù)器計數(shù)法、比濁法、培養(yǎng)法等等。計數(shù)器計數(shù)法即用血細(xì)胞計數(shù)器進行計數(shù)。由于計數(shù)室的體積是一定的(0.1mm³)，可根據(jù)計數(shù)器刻度內(nèi)的細(xì)菌數(shù)計算樣品中的含菌數(shù)。此方法屬于手工檢測，細(xì)菌濃度要求嚴(yán)格(一般細(xì)菌濃度在10⁴～10⁷個/ml)，需要專業(yè)人員完成，耗時長，最后分析結(jié)果可能會因為操作人員的改變而出現(xiàn)差距。培養(yǎng)法是日常生活、生產(chǎn)檢測以及實驗室檢測最常用的活菌計數(shù)法，包括平板培養(yǎng)法和涂布培養(yǎng)法，是根據(jù)每個活的細(xì)菌能生長出一個菌落的原理設(shè)計的。培養(yǎng)法成本低、操作簡單，培養(yǎng)結(jié)果以30～300個菌落為宜，因而待測菌液濃度要求嚴(yán)格，且培養(yǎng)周期長(一般需要24～48h)，操作環(huán)境要求嚴(yán)格。比濁法又稱濁度測定法，是根據(jù)液體的渾濁程度反推液體中懸浮物的濃度。細(xì)菌的生長使得培養(yǎng)液變渾濁，在一定波長范圍內(nèi)，菌液的濃度和渾濁度成正比，用分光度計測定渾濁度，即可推算出細(xì)菌濃度。這種方法簡單、操作便捷，但只能檢測含有大量細(xì)菌的懸浮液，得出相對的細(xì)菌數(shù)目，精確度低，對顏色太深的樣品不能用此法測量。

目前，還有一種快速評價細(xì)菌污染程度的方法-ATP法。三磷酸腺苷(AdenosineTriphosphate，ATP)是一切生命體能量的直接來源，普遍存在于動植物細(xì)胞、微生物和食物殘留中。ATP熒光檢測法是根據(jù)螢火蟲發(fā)光原理開發(fā)的快速檢測技術(shù)。在有氧條件下，蟲熒光素酶可催化蟲熒光素和ATP之間發(fā)生氧化反應(yīng)形成氧化熒光素并發(fā)出熒光，發(fā)出的熒光強度與ATP含量呈正比例關(guān)系。通過測試熒光信號的強度可得知待測目標(biāo)被污染的程度，因此檢測ATP可作為判斷是否潔凈的直觀指標(biāo)。

但是ATP法只能檢測到目標(biāo)物被污染的程度，即細(xì)胞內(nèi)、細(xì)胞外所有ATP的值，包括游離、動植物體細(xì)胞以及細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的ATP。動植物體細(xì)胞中所含的ATP量是細(xì)菌ATP量的100～1000倍，而釋放生物細(xì)胞外的游離ATP同樣也會對細(xì)菌ATP檢測產(chǎn)生影響，因而如果要用ATP法檢測細(xì)菌數(shù)量的話，必須排除游離、動植物體細(xì)胞ATP對檢測的影響。當(dāng)前的ATP法檢測儀無法區(qū)分當(dāng)前發(fā)光值是由于生物細(xì)胞釋放到體外的游離ATP造成的，還是動植物、微生物細(xì)胞內(nèi)ATP造成的，因而無法直接應(yīng)用到細(xì)菌檢測中去。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種細(xì)菌總數(shù)的快速檢測方法，實現(xiàn)利用ATP檢測儀準(zhǔn)確對細(xì)菌計數(shù)的目的。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種細(xì)菌總數(shù)的快速檢測方法，包括以下步驟：

1)待測樣本液和體細(xì)胞ATP釋放劑混合反應(yīng)，得到除體細(xì)胞ATP溶液；