[發(fā)明專利]一種基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811487281.2 | 申請日: | 2018-12-06 |
| 公開(公告)號(hào): | CN109651524A | 公開(公告)日: | 2019-04-19 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 褚銘南 | 申請(專利權(quán))人: | 桐鄉(xiāng)市博奧生物科技有限公司 |
| 主分類號(hào): | C08B37/00 | 分類號(hào): | C08B37/00 |
| 代理公司: | 嘉興啟帆專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33253 | 代理人: | 廖銀洪 |
| 地址: | 314000 浙江省嘉興市桐*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 北冬蟲夏草 多糖提取物 固體發(fā)酵 北冬蟲夏草子實(shí)體 多糖濃縮液 多糖提取 無色溶液 粗多糖 種子液 混合液提取 菌種培養(yǎng) 離心處理 連續(xù)處理 提取純化 提取效率 脫色 混合液 產(chǎn)率 蛋白 | ||
1.一種基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:包括如下步驟:
A、將北冬蟲夏草菌種接種到北冬蟲夏草種子培養(yǎng)基上,放進(jìn)搖床培養(yǎng)箱,培養(yǎng)2.5-4d,所述北冬蟲夏草種子培養(yǎng)基的組成包括以下重量份的原料:蔗糖20-30份、酵母膏1.5-3份、磷酸二氫鉀0.8-1.1份硫酸鎂0.5-0.7份、蒸餾水1000份;
B、將步驟A得到的種子液,接種到經(jīng)滅菌處理的北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基上,接種量為8-11%,放進(jìn)恒溫恒濕培養(yǎng)箱中,在28.5℃溫度條件下,發(fā)酵5-8天,得到北冬蟲夏草子實(shí)體;所述北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基包括以下重量份的原料:小麥粉1000份,土豆粉190-215份、葡糖糖25-35份、磷酸二氫鉀2.1-3.5份、蛋白陳2.5-3.6份、硫酸鎂0.9-1.3份、蒸餾水450-600份;
C、將步驟B得到的北冬蟲夏草子實(shí)體放入破壁機(jī)中,加入10-12倍質(zhì)量的蒸餾水,粉碎5-15min,得到北冬蟲夏草混合液;
D、將步驟C得到的北冬蟲夏草混合液,超聲波處理40-50min,在70-80℃下回流提取3-4.5h,提取液過濾后濃縮,得到多糖濃縮液;
E、在步驟D得到的多糖濃縮液中加入2.8-3.4倍體積的無水乙醇,攪拌后冷卻至4℃,靜置18-36小時(shí),進(jìn)行離心處理,并將沉淀烘干得到北冬蟲夏草多糖提取物;
F、步驟E得到的北冬蟲夏草多糖提取物加蒸餾水溶解,調(diào)節(jié)pH值至8-9,滴加雙氧水溶液至無色,50-60℃保溫2-3h,得到北冬蟲夏草多糖提取物無色溶液;
G、將步驟F得到的北冬蟲夏草多糖提取物無色溶液與木瓜蛋白酶和淀粉酶混合溶液混合,兩者的體積比為1:(0.45-0.6),60-65℃酶解1-2h;在酶解液中加入20%體積的Sevage試劑,振蕩培養(yǎng)0.5-1h,然后多次離心直至無蛋白沉淀析出為止,取上清液,烘干,得到北冬蟲夏草粗多糖;
H、將步驟G得到的北冬蟲夏草粗多糖用蒸餾水溶解后上DEAE瓊脂糖凝膠FF離子交換層析柱,用氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗脫,得到北冬蟲夏草多糖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:步驟A中所述北冬蟲夏草種子培養(yǎng)基的組成包括以下重量份的原料:蔗糖25份、酵母膏2.5份、磷酸二氫鉀0.9份硫酸鎂0.6份、蒸餾水1000份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:步驟B中所述北冬蟲夏草固體培養(yǎng)基包括以下重量份的原料:小麥粉1000份,土豆粉205份、葡糖糖30份、磷酸二氫鉀2.8份、蛋白陳3.2份、硫酸鎂1.1份、蒸餾水520份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:步驟A中所述搖床培養(yǎng)箱的培養(yǎng)條件控制為110-125r/min的轉(zhuǎn)速、28℃的環(huán)境溫度。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:步驟D中所述的濃縮是在60℃下濃縮。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:步驟F中所述的雙氧水溶液,體積濃度為25%。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:步驟G中所述木瓜蛋白酶和淀粉酶混合溶液中木瓜蛋白酶與淀粉酶的質(zhì)量比為0.8:(1.2-1.4)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于固體發(fā)酵的北冬蟲夏草多糖提取純化工藝,其特征在于:步驟G中所述的離心是6000r/min離心10min。
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