本發明涉及一種基于CD19和CD22的雙重嵌合抗原受體基因修飾的免疫細胞及其應用，所述雙重嵌合抗原受體包括嵌合抗原受體CD19和嵌合抗原受體CD22。所述嵌合抗原受體包括抗原結合結構域、跨膜結構域、共刺激信號傳導區和CD3ζ信號傳導結構域以及可誘導自殺融合結構域串聯而成。本發明的嵌合抗原受體能特異性的識別腫瘤表面抗原CD19和CD22，相比于使用其他單一嵌合抗原受體T細胞，聯合使用兩種抗原靶向CAR?T細胞使得治療效果更好，不易發生CD19逃逸，更容易緩解疾病。

技術領域

本發明涉及腫瘤的細胞免疫治療領域，尤其涉及一種基于CD19和CD22的雙重嵌合抗原受體基因修飾的免疫細胞及其應用，具體為以腫瘤特異靶點CD19和CD22為基礎的嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞技術的構建方法及其在抗腫瘤治療中的應用。

背景技術

隨著腫瘤免疫學理論和臨床技術的發展，嵌合抗原受體T細胞療法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成為目前最有發展前景的腫瘤免疫療法之一。一般，嵌合抗原受體CAR由一個腫瘤相關抗原結合區、胞外鉸鏈區、跨膜區域以及胞內信號轉導區組成。通常，CAR包含抗體的單鏈片段可變(Single chain fragmentvariable，scFv)區或對腫瘤相關抗原(tumor associated antigen,TAA)具有特異性的結合結構域，其通過鉸鏈和跨膜區與T細胞信號傳導分子的胞質結構域偶聯。最常見的淋巴細胞活化部分包括與T細胞效應物功能觸發(例如CD3ζ)部分串聯的T細胞共刺激結構域。CAR介導的過繼性免疫療法允許CAR-移植的T細胞以非HLA限制性方式直接識別靶腫瘤細胞上的TAA。

大多數患有B細胞惡性腫瘤(包括B細胞急性淋巴細胞性白血病(B cell acutelymphocytic leukemia,leukemia,B-ALL)和慢性淋巴細胞性白血病(chroniclymphocytic leukemia,CLL)的患者將由于其疾病而死亡。治療這些患者的一種方法是通過CAR的表達，對T細胞進行遺傳修飾以靶向在腫瘤細胞上表達的抗原。CAR是經設計以人白細胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)非依賴性方式識別細胞表面抗原的抗原受體。嘗試使用表達CAR的遺傳修飾細胞來治療這些類型的患者已經取得了有前景的成功。

CD19分子是治療B淋巴細胞系腫瘤潛在的靶點，也是CAR研究中的熱點，CD19的表達局限于正常和惡性B細胞，是廣泛接受的用來安全測試的CAR靶標。靶向CD19分子的嵌合抗原受體基因修飾的T細胞(CD19 CAR-T)在治療多發性、難治性的急性B淋巴細胞白血病上取得巨大成功，而在難治性、復發性慢性B淋巴細胞白血病和B淋巴細胞系淋巴瘤的治療中療效明顯較差。

CN 104788573 A公開了了一種嵌合抗原受體hCD19scFv-CD8α-CD28-CD3ζ及其用途，該第二代嵌合抗原受體由抗人CD19單克隆抗體HI19a輕鏈和重鏈可變區(hCD19scFv)、人CD8α鉸鏈區、人CD28跨膜區和胞內區、以及人CD3ζ胞內區結構串聯構成，該專利中的CD19在進行一次CAR-T細胞回輸后，CD19的表達量會降低，容易逃過免疫機制，而且第二代CART的免疫因子風暴大，有安全性的隱慮。

此外，根據本中心以第四代CD19嵌合抗原受體治療淋巴瘤的實際統計，在9位病人當中，其中有4位腫瘤組織免疫組化染色CD19強陽性的病人，在接受CD19嵌合抗原受體治療后都達到完全緩解，另外5位CD19弱表達的病人，只有1位在治療后達到緩解，其余2位只有部分緩解，1位維持疾病的穩定，1位疾病有進展，此結果反應了單以CD19嵌和抗原受體治療的困境。

因此，針對CD19陰性復發，以及CD19低表達的B細胞腫瘤，聯合另一種潛在的嵌合抗原受體能夠解決CD19存在的易突變和表達量低的問題顯得尤為重要。除CD19外，CD22亦是治療惡性B細胞腫瘤的潛力靶點，CD22與CD19一樣只表達在B細胞系的細胞表面。根據先前抗CD22抗體臨床試驗的研究顯示，CD22已被評估并且確認為治療B細胞惡性腫瘤的良好標的。