本發明公開了一種用于藥品制劑中控的大腸桿菌檢測試劑盒，包括微孔板、與微孔板匹配的微孔板蓋、可拆卸地設置在微孔板底部的主電磁吸盤、核酸提取用磁珠、連接有大腸桿菌pyrH正向引物的羧基磁珠和5’端帶熒光標記的大腸桿菌pyrH反向引物；微孔板包括多個微孔；微孔的孔壁突出于微孔與相鄰微孔之間的第一連接區域以及微孔與微孔板側壁之間的第二連接區域；微孔板蓋上設置有與微孔的內徑匹配的環形凸起；微孔板與微孔板蓋被設置為可放置入PCR儀中，起到代替PCR管和PCR架的作用。本發明的試劑盒靈敏度和特異性均高，且操作方便，快捷，無需電泳進行檢測PCR結果。

技術領域

本發明涉及藥品制劑檢控領域，尤其涉及一種用于藥品制劑中控的大腸桿菌檢測試劑盒。

背景技術

藥品生產涉及將藥材作為原料進行配制加工，而藥品往往又可以成為培養微生物的培養基或培養液。藥品存在注射劑、片劑、膠囊等多種劑型，涉及較多的生產環節，且生產區域所需范圍較大，物料流轉路線較長，從而物料被微生物污染的概率較大，有的甚至會污染到致病菌，造成產品的微生物項目檢查不符合《中國藥典》的規定，輕者造成藥品質量不合格，重者威脅到患者的生命。細菌污染處于藥品微生物污染的首位，其中大腸桿菌是一種常見的環境微生物。檢測和控制藥品制劑中的大腸桿菌有無十分重要。

對于大多數制劑，1克或1毫升不得檢出大腸桿菌。對檢測技術的靈敏度和特異性要求較高。比濁法等傳統檢測方法難以滿足要求。PCR(聚合酶鏈式反應)可以將微量的DNA進行大幅的提升，但是其結果檢測往往需要轉板或跑電泳。在批次藥品制劑高通量檢測過程中，每增加一個環節就會帶來許多重復操作，帶來極大不便。

多種常見的傳統微孔板包括開放式孔按8×12矩形陣列排列的96孔板，微孔數量更多的有16×24矩形陣列排列的384孔板和32×48矩形陣列排列的1536孔板。大量的微孔雖然滿足了高通量檢測的目的，由于每個微孔的容量非常小，難以實現物質的有效混合和分離。

基因芯片雖然可以快速地、高通量地檢測到相關基因，從而判斷出是否帶有某種微生物，但是往往是先進行PCR，然后再將PCR產物加入基因芯片中來完成測定。而且基因芯片的價格非常昂貴。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明提供一種用于藥品制劑中控的大腸桿菌檢測試劑盒。

其具體方案是：一種用于藥品制劑中控的大腸桿菌檢測試劑盒，包括微孔板、與微孔板匹配的微孔板蓋、可拆卸地設置在微孔板底部的主電磁吸盤、核酸提取用磁珠、連接有大腸桿菌pyrH正向引物的羧基磁珠和5’端帶熒光標記的大腸桿菌pyrH反向引物；微孔板包括多個微孔；微孔的孔壁突出于微孔與相鄰微孔之間的第一連接區域以及微孔與微孔板側壁之間的第二連接區域；微孔板蓋上設置有與微孔的內徑匹配的環形凸起；微孔板與微孔板蓋被設置為可放置入PCR儀中，起到代替PCR管和PCR架的作用。

進一步地，核酸提取用磁珠為表面包被二氧化硅的納米磁珠。

進一步地，大腸桿菌pyrH正向引物由5’端的連接分子和3’端的核心引物組成；連接分子為-NH₂-(CH₂)n-(T)m-，n＝4-8，m＝10-18；核心引物的序列如SEQ ID NO.1所示；5’端帶熒光標記的大腸桿菌pyrH反向引物的序列如SEQ ID NO.2所示；熒光標記為Cy3或Cy5。

進一步地，還包括編號為CMCC44102的大腸桿菌。用于作為陽性對照。

進一步地，還包括輔助引物、PCR緩沖液、dNTP和Taq DNA聚合酶；輔助引物的序列包含在大腸桿菌pyrH正向引物的序列中。輔助引物可在擴增初期與5’端帶熒光標記的大腸桿菌pyrH反向引物先預擴增出一些DNA片段，以便于連接在磁珠上的正向引物更容易與預擴增的DNA片段退火結合，提高磁珠參與的PCR的效率，提高檢測的靈敏度。