一株吡哆醇單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。本發明制備了吡哆醇完全抗原，并將它與等量弗氏佐劑混合乳化完全，通過背部皮下注射免疫BALB/c小鼠，得到一株吡哆醇單克隆抗體雜交瘤細胞株SS0708，其保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14687，保藏日期為2017年9月5日。此細胞株分泌的單克隆抗體，對吡哆醇具有較好的特異性和檢測靈敏度（IC₅₀為250 ng/mL）。本發明成果可用于建立嬰幼兒食品、乳品和特殊醫學用途食品中吡哆醇含量的免疫檢測方法，具有實際應用價值。

技術領域

本發明涉及一株吡哆醇單克隆抗體雜交瘤細胞株及其應用，屬于食品安全免疫檢測領域。

背景技術

吡哆醇屬于B族維生素，是具有維生素B6作用的物質之一，也稱為抗皮炎素或維生素B6，廣泛存在于食品中并且可作為膳食補充劑。吡哆醇在生物體內容易變成作為輔酶的吡哆醛-5-磷酸參與機體新陳代謝。缺少吡哆醇的動物，蛋白質轉變為碳水化合物和脂肪將受到阻抑，亦會出現鼻炎、口炎和皮炎。此外缺乏維生素B6還會引起各種臟器的動脈硬化癥。由于吡哆醇在中樞神經系統中起著重要的作用，因此缺乏吡哆醇會引起痙攣，給予吡哆醇便可很快恢復。吡哆醇用于治療和預防吡哆醇缺乏、鐵粒幼細胞性貧血、吡哆醇依賴性癲癇及某些代謝紊亂，因此食品中吡哆醇的控制尤為重要。

目前吡哆醇含量分析方法有氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、氣質聯用(GC-MS)、液質聯用 (LC-MS)等儀器方法，但這些方法需要昂貴的儀器、專業的操作人員，且樣品前處理復雜，成本高，時間長，不能實現大量樣品的快速檢測，因此建立快速簡便的吡哆醇檢測方法具有重要意義。酶聯免疫法（ELISA）是一種極為高效、敏感、快速的檢測方法，檢測時對樣本的純度要求不高而且操作簡便，適用于大量樣本的現場快速檢測。建立高效的免疫學檢測方法，篩選高特異性的單克隆抗體是重要前提。

發明內容

本發明的目的是提供一株吡哆醇單克隆抗體雜交瘤細胞株SS0708及其應用，由該細胞株制備的抗體對吡哆醇具有較好的特異性和檢測靈敏度，可以用來建立吡哆醇的免疫學檢測方法。

本發明的技術方案，一株吡哆醇單克隆抗體雜交瘤細胞株，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.14687，保藏日期為2017年9月5日。

吡哆醇單克隆抗體，由所述保藏編號為CGMCC No.14687，吡哆醇單克隆抗體雜交瘤細胞株SS0708分泌產生。

所述吡哆醇單克隆抗體的應用，用于建立吡哆醇含量的免疫檢測方法，將其應用于殘留吡哆醇的檢測中。

所述檢測領域為嬰幼兒食品、乳品或特殊醫學用途食品中。

所述吡哆醇免疫原Pyr-KLH的制備方法，主要包括以下步驟：

（1）半抗原Pyr的制備：將吡哆醇（20g，118mmol）溶解于200mL丙酮中，加入200mL 2，2-二甲氧基丙烷和對甲苯磺酸（81.4g，473mmol），130℃攪拌過夜。將反應混合物倒入冰水中冷卻并用DCM提取水相。混合有機相并用鹽水洗滌，Na₂SO₄干燥濃縮。用乙醚重結晶所得產物。將混合物過濾，得到白色固體化合物2；

0℃氮氣下，將NaH（6.88 g，287 mmol，60%有機相）的溶液加入到70 mL THF中。加入溶解在200 mLTHF中的化合物2（15 g，71.7 mmol）。回流30min，冷卻至室溫后，加入芐基溴（24.5g，143mmol），再次回流4h，然后用二氯甲烷萃取。收集有機提取物，用鹽水洗滌，干燥濃縮，得到深棕色油狀物。用硅膠柱純化殘留物，得到棕色油狀物3；