5.用于制備權利要求1所述吡哆醇單克隆抗體雜交瘤細胞株SS0708的免疫原Pyr-KLH的制備方法，其特征是步驟如下：

（1）半抗原Pyr的制備：

a、將吡哆醇20g，118mmol溶解于200mL丙酮中，加入200mL 2，2-二甲氧基丙烷和對甲苯磺酸81.4g，473mmol，130℃攪拌過夜；將反應混合物倒入冰水中冷卻并用DCM提取水相，混合有機相并用鹽水洗滌，Na₂SO₄干燥濃縮，用乙醚重結晶所得產物，將混合物過濾，得到白色固體化合物2；

b、0℃氮氣下，將NaH 6.88 g，287 mmol，60%有機相的溶液加入到70 mL THF中，加入溶解在200 mL THF中的15 g化合物2，71.7 mmol；回流30min，冷卻至室溫后，加入芐基溴24.5g，143mmol，再次回流4h，然后用二氯甲烷萃取；收集有機提取物，用鹽水洗滌，干燥濃縮，得到深棕色油狀物，用硅膠柱純化殘留物，得到棕色油狀化合物3；

c、12g，40.1mmol化合物3的水溶液中加入24 mL 98%甲酸，50℃攪拌24 h，然后用飽和NaHCO₃溶液將其調節至pH 7；中和后，用二氯甲烷多次萃取反應混合物，將有機萃取物干燥濃縮，得到深棕色固體，用快速色譜法純化粗產物，得到化合物4；

d、0℃氮氣下，將芐基二甲基苯基氯化銨7.60g，26.6mmol溶解于30mL無水甲醇中，將該溶液加入到甲醇鈉1.80g，34mmol溶液中，然后向混合物中加入含4.50g，17.4mmol化合物4的60mL甲醇溶液中；室溫下攪拌20min，蒸發濃縮混合物并將其加入到含有500mL熱甲苯的圓底燒瓶中，反應30min后，將混合物濃縮；反應后，油殘渣溶解在飽和氯化銨溶液中，然后用二氯甲烷萃取，將有機提取物干燥濃縮，將有機萃取物經硅膠柱純化，得到化合物5；

e、含2.60g，169mmol化合物5的60mL甲苯溶液加入CS₂CO₃ 3.70g·114mmol和丙烯酸乙酯2.80g，22.6mmol，85℃攪拌過夜；將反應混合物冷卻并倒入水中，然后用HCl將溶液調至pH7，用EA萃取水相；混合有機相用鹽水洗滌，用Na₂SO₄干燥并濃縮；用硅膠柱純化殘留物，得到化合物6；

d、含1.60g，3.50mmol化合物6的THF/H₂O 16.0/4.00mL計，溶液加入LiOH H₂O 34.7mg，890mmol，室溫下攪拌過夜；然后用HCl將溶液調整到pH7，用EA提取水層；混合有機層用鹽水洗滌，經Na₂SO₄干燥濃縮，得到化合物7；

含1g，2.30mmol化合物7的20mL MeOH溶液中加入100mg Pd/C，室溫下攪拌過夜；將混合物過濾并濃縮，得到白色固體化合物8即Pyr；

（2）免疫原Pyr-KLH的制備：稱取半抗原Pyr，1-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，以及N-羥基琥珀酰亞胺，用無水N,N-二甲基甲酰胺溶解得到A液；取鑰孔血藍蛋白KLH，用硼酸緩沖溶液溶解得到B液；在室溫條件，逐滴將A液加入到B液中，室溫反應過夜，即得偶聯物Pyr-KLH混合液，通過透析分離完全抗原和未偶聯的小分子半抗原得到免疫原Pyr-KLH。