本發明涉及一種親和層析的填料的篩選方法，包括以下步驟：在相同的流速、保留時間下，將含有單克隆抗體的上樣液分別連續上樣到多個親和層析柱中，使每個親和層析柱過載，每個親和層析柱中含有一種親和層析填料，且至少有兩個親和層析柱中的親和層析填料不同；將各個親和層析柱的流穿液按照穿透的先后順序分裝為多個待測液；檢測各個待測液中單克隆抗體的濃度；根據各待測液中單克隆抗體的濃度，確定各種親和層析填料對單克隆抗體的動態結合能力，并根據動態結合能力篩選親和層析填料。按照上述親和層析的填料的篩選方法，能夠快速篩選得到適合該單克隆抗體的親和層析填料。

技術領域

本發明涉及生物領域，特別是涉及一種親和層析填料的篩選方法。

背景技術

自第一個抗移植后免疫排斥反應的鼠源單克隆抗體muromonab-CD3(OKT3) 經美國食品藥品監督管理局(Food and Drug Administration,FDA)批準上市以來，單克隆抗體正越來越廣泛地應用于治療性制藥領域。

在單克隆抗體的生產開發中，單克隆抗體純化工藝的開發更是其中極其重要的一環。目前最普遍的平臺化純化技術為：將含有抗體的細胞培養液經過澄清處理、親和層析、病毒滅活、離子交換層析中度純化、離子交換層析精細純化、除病毒過濾以及超濾濃縮及緩沖液置換，從而得到純化的單克隆抗體。

在親和層析工藝的開發過程中，如何快速高效地從品類繁多的層析填料中挑選出一至兩種滿足工藝需求的填料是富有挑戰性的，主要涉及層析填料的動態吸附能力的評價。傳統的篩選方法是通過設置不同的流速、保留時間，多次運行樣品和層析介質的吸附/洗脫過程，通過利用蛋白純化儀監測流穿中目標抗體的穿透位置及穿透的比例，擬合流穿曲線來確定。這種篩選方法的缺點是工藝時間長，材料及樣品消耗量大。

發明內容

基于此，提供一種快速的親和層析的填料的篩選方法。

一種親和層析的填料的篩選方法，包括以下步驟：

在相同的流速、保留時間下，將含有單克隆抗體的上樣液分別連續上樣到多個親和層析柱中，使每個所述親和層析柱過載，其中，每個所述親和層析柱中含有一種親和層析填料，且至少有兩個所述親和層析柱中的親和層析填料不同；

將各個所述親和層析柱的流穿液按照穿透的先后順序分裝為多個待測液；

檢測各個所述待測液中所述單克隆抗體的濃度；

根據所述待測液中所述單克隆抗體的濃度，確定各種親和層析填料對所述單克隆抗體的動態結合能力；及

根據所述動態結合能力篩選所述親和層析填料。

上述親和層析的填料的篩選方法，將含有單克隆抗體的上樣液分別連續上樣到多個親和層析柱中，使親和層析柱過載，并按照穿透的先后順序將流穿液分裝為多個待測液，通過比較待測液中的單克隆抗體的濃度，能夠快速分析每種親和層析填料對該單克隆抗體的動態結合能力，從而篩選得到適合該單克隆抗體的親和層析填料。另外，整個篩選過程中，一次連續上樣就能評價一種親和層析填料的結合能力，單克隆抗體的用量少，涉及的耗材用量少。

在其中一個實施例中，加入到每個所述親和層柱中的所述上樣液的體積與該上樣液中所述單克隆抗體的質量濃度之積大于所述親和層析填料的固有載量與該親和填料的體積之積。

在其中一個實施例中，所述檢測每個所述待測液中所述單克隆抗體的濃度的步驟包括：

分別將各所述親和層析填料裝填到多孔過濾板上，用平衡液平衡各所述親和層析填料，得到微孔層析板；

分別將各所述親和層析柱的多個所述待測液等體積加到所述微孔層析板對應的孔中，得到多個待孵育液；

將各所述待孵育液孵育、離心及洗脫，得到多個洗脫液；及