[發明專利]親和層析填料的篩選方法有效
| 申請號： | 201810982583.0 | 申請日： | 2018-08-27 |
| 公開（公告）號： | CN109206508B | 公開（公告）日： | 2020-07-24 |
| 發明（設計）人： | 劉云鵬;蘆迪;劉恒嘉 | 申請（專利權）人： | 深圳市菲鵬生物制藥股份有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/00 | 分類號： | C07K16/00;C07K1/22 |
| 代理公司： | 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224 | 代理人： | 潘霞 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市前海深港合作區前*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 親和 層析 填料 篩選 方法 | ||
1.一種親和層析填料的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)確認各待測親和層析填料對單克隆抗體的靜態結合能力，初步篩選適合所述單克隆抗體的多種親和層析填料，并將初步篩選的各親和層析填料分別裝到不同親和層析柱中；
2)在相同的流速、保留時間下，將含有相同濃度的單克隆抗體的上樣液分別連續上樣到步驟1)的各親和層析柱中并使其過載，并將每個親和層析柱的流穿液按照穿透的先后順序分裝為多個待測液，每個所述親和層析柱的多個待測液中，至少一個待測液的單克隆抗體的濃度與所述上樣液中的單克隆抗體的濃度的比值處于0.05～0.15之間；
3)檢測各個待測液中單克隆抗體的濃度；
4)根據每個待測液中單克隆抗體的濃度，確定各種親和層析填料對單克隆抗體的動態結合能力，其中，在待測液中單克隆抗體的濃度與上樣液中單克隆抗體的濃度的比值相同的條件下，上樣總體積大的親和層析填料的動態結合能力大，或者在相同的時間條件下，待測液中單克隆抗體濃度小的親和填料的動態結合能力大；
5)根據動態結合能力選擇用于分離所述單克隆抗體的親和層析填料。
2.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，加入到每個親和層柱中的上樣液的體積與該上樣液中單克隆抗體的質量濃度之積大于親和層析填料的固有載量與該親和填料的體積之積。
3.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，步驟3)的具體步驟包括：
分別將各親和層析填料裝填到多孔過濾板上，用平衡液平衡各親和層析填料，得到微孔層析板；
分別將各親和層析柱的多個所述待測液等體積加到微孔層析板對應的孔中，得到多個待孵育液；
將各待孵育液孵育、離心洗脫，得到多個洗脫液；及
檢測各洗脫液中單克隆抗體的濃度，得到各待測液中單克隆抗體的濃度。
4.根據權利要求3所述的篩選方法，其特征在于，所述將各待孵育液孵育、離心洗脫，得到多個洗脫液的步驟包括：
將各待孵育液孵育、離心，得到多個離心液；
檢測各個離心液中的單克隆抗體的濃度，若離心液中的單克隆抗體的濃度與上樣液中單克隆抗體的濃度的比值大于5％，則將離心液再次加入至所述微孔層析板對應的孔中進行孵育，然后離心，檢測單克隆抗體的濃度，直至每個離心液中的單克隆抗體的濃度與上樣液中單克隆抗體的濃度的比值不大于5％，得到吸附有單克隆抗體的微孔層析板；及
用洗脫緩沖液清洗吸附有所述單克隆抗體的微孔層析板，得到多個洗脫液。
5.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，確定各種待測親和層析填料對單克隆抗體的動態結合能力的步驟包括：
計算每個待測液對應的上樣總體積；及
計算每個待測液中單克隆抗體的濃度與上樣液中單克隆抗體的濃度的比值，在相同的比值下，上樣總體積大的親和層析填料的動態結合能力大。
6.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述上樣液為含有所述單克隆抗體的發酵液上清。
7.根據權利要求1所述的篩選方法，其特征在于，所述確認每種親和層析填料對單克隆抗體的靜態結合能力的步驟包括：
將所述單克隆抗體配制成不同濃度的上樣樣品；
分別將各所述親和層析填料等體積裝填到多孔過濾板上，用親和層析平衡液平衡每種親和層析填料，得到微孔層析板；
分別將不同濃度的上樣樣品等體積加到微孔層析板上，并進行孵育、離心、收集上清液，檢測上清液中的單克隆抗體的濃度；及
根據每種親和層析填料的上清液中的單克隆抗體濃度，確認每種親和層析填料對所述單克隆抗體的靜態結合能力。
8.根據權利要求7所述的篩選方法，其特征在于，采用梯度稀釋法將所述單克隆抗體配制成不同濃度的上樣樣品。
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