本發明提出一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，通過對含有轉氨酶的菌體細胞離心、洗滌和破碎后再加入硫酸銨溶液去掉破碎細胞體，得到上清溶液，再向上清溶液內加入硫酸銨進行靜置沉淀和分離得到轉氨酶粗品，最后向轉氨酶粗品中加入混合溶液進行攪拌、離心和出去上清后得到成品轉氨酶；本發明提出通過硫酸銨鹽析沉淀分離出菌體細胞內的活性轉氨酶，通過純化水、聚乙二醇和二甲基亞砜配置出的混合溶液可以洗掉鹽析轉氨酶粗品中大部分的硫酸銨，同時該混合溶液不會溶解轉氨酶，提取效率高，并能保持轉氨酶的催化活性，過程中不會產生大量的廢水，環保且成本低廉適用于大規模的生產。

技術領域

本發明屬于生物制藥技術領域，尤其涉及一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法。

背景技術

轉氨酶是催化氨基酸與酮酸之間氨基轉移的一類酶，普遍存在于動物、植物組織和微生物中，心肌、腦、肝、腎等動物組織以及綠豆芽中，它在生物催化反應中參與氨基酸的一系列分解和合成，它催化某一氨基酸的α-氨基酸轉移到另一α-酮酸的酮基上，生成相應的氨基酸，同時具有一定的選擇性，尤其是不對稱合成上的應用，體現了它的高效、專一和穩定性，并且催化條件溫和，更加節約成本。

國家知識產權局于2014年5月13日公布的一篇專利申請號為201410198961.8，名稱：一種從發酵液中連續提取谷氨酰胺轉氨酶的方法，此專利提出通過發酵得到的含酶菌體，經過陶瓷復合膜截留分子量為6000蛋白，控制溫度4-10℃，然后通過溶劑沉淀、濃縮、真空干燥、加輔料保護酶活等方法得到較純的轉氨酶，該一種從發酵液中連續提取谷氨酰胺轉氨酶的方法存在以下問題：1.膜分離工藝在實際制備過程中設備投入較大，陶瓷膜需反復清洗活化，會產生大量廢水，造成成本較高；2.使用溶劑沉淀以及濃縮過程中會使部分酶活性喪失，處理過程較長，實用性窄，不適合大批量制備。

國家知識產權局于2009年11月23日公布的一篇專利申請號為200910154642.6，名稱：一種谷氨酰胺轉氨酶制備方法，此專利提出通過將發酵液破碎處理后離心得到上清含有轉氨酶，再經過微濾膜除菌和除去雜質得到粗酶液，再經過超濾膜處理，截留一定分子量的蛋白，即得到轉氨酶產物，該一種谷氨酰胺轉氨酶制備方法存在以下問題：通過微濾和超濾來純化轉氨酶，制備成本較高，設備投入量大，同樣不適用于大規模生產。

酶對外部環境敏感，易失去催化活性，所以它的提取方法是關鍵，大多數酶制劑需要高純度，因此一般使用超濾或層析，而對于催化用酶，要求相對純度可以低一些，一般用鹽析沉淀得到粗蛋白，之后需進行層析或透析脫鹽，對于大規模生產顯然有很大限制，尤其是對脫鹽設備的投入大和產生的廢水量較大，附加值較低的產品投入就不經濟。因此，本發明提出一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法以解決現有技術的不足之處。

發明內容

針對上述問題，本發明提出硫酸銨鹽析沉淀分離出菌體細胞內的活性轉氨酶，通過純化水、聚乙二醇和二甲基亞砜配置出的混合溶液可以洗掉鹽析轉氨酶粗品中大部分的硫酸銨，同時該混合溶液不會溶解轉氨酶，提取效率高，并能保持轉氨酶的催化活性，過程中不會產生大量的廢水，環保且成本低廉適用于大規模的生產。

一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，包括如下步驟：

步驟一：通過發酵培養并誘導出含有轉氨酶的菌體細胞，再經過離心、洗滌和破碎得到轉氨酶混合液；

步驟二：向上述步驟一中的轉氨酶混合液中加入濃度為6%—30%的硫酸銨溶液，控制溫度低于10℃，再離心去掉破碎細胞體，得到上清溶液；

步驟三：向上述步驟二中的上清溶液中加入硫酸銨進行靜置沉淀，沉淀后進行離心，得到轉氨酶粗品；

步驟四：向上述步驟三中的轉氨酶粗品中加入混合溶液，進行攪拌，攪拌后進行離心，離心后再去除上清，得到成品轉氨酶固體后進行真空冷凍干燥保存即可。