[發明專利]一種具有催化活性轉氨酶的提取方法在審
| 申請號： | 201810935519.7 | 申請日： | 2018-08-16 |
| 公開（公告）號： | CN109182287A | 公開（公告）日： | 2019-01-11 |
| 發明（設計）人： | 葉質強;周擁軍;馮露;鄂松;王心潔 | 申請（專利權）人： | 湖北省宏源藥業科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 438600 湖北省*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 轉氨酶 催化活性 混合溶液 粗品 硫酸銨 菌體細胞 清溶液 破碎 二甲基亞砜 硫酸銨溶液 硫酸銨鹽析 沉淀分離 靜置沉淀 提取效率 純化水 鹽析 洗滌 溶解 廢水 環保 配置 生產 | ||
1.一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：包括如下步驟：
步驟一：通過發酵培養并誘導出含有轉氨酶的菌體細胞，再經過離心、洗滌和破碎得到轉氨酶混合液；
步驟二：向上述步驟一中的轉氨酶混合液中加入濃度為6%—30%的硫酸銨溶液，控制溫度低于10℃，再離心去掉破碎細胞體，得到上清溶液；
步驟三：向上述步驟二中的上清溶液中加入硫酸銨進行靜置沉淀，沉淀后進行離心，得到轉氨酶粗品；
步驟四：向上述步驟三中的轉氨酶粗品中加入混合溶液，進行攪拌，攪拌后進行離心，離心后再去除上清，得到成品轉氨酶固體后進行真空冷凍干燥保存即可。
2.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟一中的菌體細胞為：一株產谷氨酰胺轉氨酶轉基因菌株以4％的接種量接入種子培養基，在8℃，210r/min條件下培養48h后得到的菌體細胞。
3.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟一、步驟二、步驟三和步驟四中的離心均為密度梯度離心法，所述步驟一、步驟二、步驟三和步驟四均在10℃溫度下完成。
4.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟一中先將菌體細胞放入離心機內，控制離心機內的離心加速度為8000G，離心時間為5min，再進行去除上清，得到菌泥。
5.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟一中先將一株產谷氨酰胺轉氨酶轉基因菌株以4％的接種量接入種子培養基，在8℃，210r/min條件下培養24h后得到一種具有催化活性的轉氨酶菌體細胞，再將菌體細胞放入離心機內，控制離心機內的離心加速度為8000G，離心時間為5min，再進行去除上清，得到菌泥，再向菌泥內加入2倍體積PH值為7.4的磷酸緩沖溶液進行攪拌洗滌1次，然后將洗滌后的菌泥導入離心機內進行離心，控制離心機內的離心加速度為8000G，然后再加入5倍量的去離子水進行攪拌均勻，得到懸浮液，最后將懸浮液使用1200psi的高壓，在低于10℃的溫度下破碎循環2次得到菌體破碎液。
6.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟二中先加入濃度為6%—30%的硫酸銨溶液，進行攪拌20-30min，控制溫度低于10℃，再導入離心機內進行離心去掉破碎細胞體，控制離心機內的離心加速度為8000G，得到上清溶液。
7.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟三中先將上清溶液倒入容器中，緩慢加入硫酸銨固體，進行攪拌直至固體慢慢溶解，控制容器內硫酸銨的濃度為50%-70%，然后靜置沉淀2小時，再將沉淀后的上清上清溶液導入離心機內進行離心，控制離心機內的離心加速度為12000G，然后去除上清，得到轉氨酶粗品。
8.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟四中的混合溶液為純化水、聚乙二醇和二甲基亞砜按照比例3：4：3-2：5：3進行混合，然后冷卻至10℃以下，制成的混合溶液，所述混合溶液PH值為6-9。
9.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述步驟四中先向轉氨酶粗品中加入混合溶液，進行攪拌30min，保持溫度低于5℃，再通過離心機進行離心，控制離心機內的離心加速度為12000G，離心后去除上清，得到轉氨酶固體，再將轉氨酶固體放入真空冷凍干燥機干燥處理，得到成品轉氨酶，最后將成品轉氨酶保存在-20℃環境下即可。
10.根據權利要求1所述的一種具有催化活性的轉氨酶的提取方法，其特征在于：所述混合溶液經過濃縮、析出和過濾后可重復使用。
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