本發明屬于藥品分析檢測技術領域，具體涉及一種衍生化HPLC?UV法測定甲磺酸酯的方法。使用2?萘硫酚衍生化試劑對甲磺酸酯衍生化，生成在紫外光區252?253nm有吸收的衍生化產物，利用HPLC反相分配色譜法在紫外光區252?253nm測定甲磺酸酯的衍生化產物，從而實現對含甲磺酸的原料藥中甲磺酸酯的定性與定量檢測。采用本發明所述的測定方法測定時甲磺酸伊馬替尼中甲磺酸伊馬替尼和其他雜質均不會對分析造成干擾，該方法專屬性良好；方法的檢測限為0.03μg/ml，定量限為0.10μg/ml，線性關系良好；平均回收率在87.5?102.1％之間，無明顯的基質干擾；且衍生化產物在6h內穩定性良好。

技術領域

本發明屬于藥品分析檢測技術領域，具體涉及一種衍生化HPLC-UV法測定甲磺酸酯的方法。

背景技術

潛在基因毒性雜質(potential genotoxic impurities)是強致突變劑和致癌劑，能夠引起DNA突變、染色體斷裂或者DNA重組，還可能導致人類腫瘤的發生。近幾年來，隨著基因毒性雜質法規的逐步完善，美國食品和藥物管理局(FDA)和歐洲藥物管理局(EMEA)等部門對基因毒性雜質的監管要求越來越高。藥物中基因毒性雜質如果控制不當，可能會導致臨床隱患，同時也會影響新藥上市時間，因此，在藥物生產過程中，對于潛在基因毒性雜質的控制十分重要。

甲磺酸酯是一類常見的潛在基因毒性雜質，近年來越來越受到藥品監管部門的關注。甲磺酸酯的來源主要有兩個，一是甲磺酸中的殘留雜質，二是甲磺酸鹽藥物成鹽過程的副產物。

甲磺酸甲酯(MMS)和甲磺酸乙酯(EMS)是兩種常見的甲磺酸酯基因毒性雜質，歐洲藥典9.0收載了氣相色譜-質譜(GC-MS)法用于檢測甲磺酸倍他司汀中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的標準方法，該方法需要將待測物衍生化成可揮發性的碘代烷烴，然后頂空進樣，方能進行分析。而其他常見的用于測定甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的方法大多數也都是基于質譜方法，雖然質譜檢測器是一種靈敏和通用的檢測器，然而高昂的價格限制了它的廣泛使用。

高效液相色譜-紫外檢測(HPLC-UV)法是藥物質量控制的常用手段，開發一種簡單、靈敏、穩定的HPLC-UV法用于含甲磺酸的原料藥中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯具有重要意義。然而該方法的開發面臨一個重要挑戰，即甲磺酸酯缺乏能用于紫外檢測的發色基團，因此我們希望通過液相衍生化技術，利用親核取代反應，引入發色基團來解決這個問題。三乙胺和哌啶被報道作為衍生化試劑用于液相色譜-質譜(LC-MS)法和毛細管色譜-質譜(CE-MS)法測定甲磺酸酯的含量。然而，這些衍生化試劑的產物(季銨鹽)由于硅羥基作用會造成拖尾現象，降低檢測靈敏度。五氟硫酚和硫氰酸鹽是強親核試劑，被用作衍生化試劑用于氣相色譜-質譜(GC-MS)法測定甲磺酸酯含量；但五氟硫酚極易氧化，用于HPLC檢測，會產生干擾；而硫氰酸鹽衍生化會產生多種衍生化產物，導致低靈敏度。二硫代氨基甲酸鹽類被報道作為衍生化試劑用于HPLC-UV法測定甲磺酸酯含量。然而，這類試劑中的硫代酰胺/硫代烷基酯基團與酸或堿易水解，而導致衍生化效率大大降低。2-巰基吡啶被報道作為衍生化試劑用于液相色譜-質譜-質譜(LC-MS-MS)法測定甲磺酸乙酯的含量。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種衍生化HPLC-UV法測定甲磺酸酯的方法。該方法簡單，專屬性好，線性關系良好，平均回收率高，衍生化產物穩定性良好，檢測限較低。

本發明所述的衍生化HPLC-UV法測定甲磺酸酯的方法，使用2-萘硫酚衍生化試劑對甲磺酸酯衍生化，生成在紫外光區252-253nm有吸收的衍生化產物，利用HPLC反相分配色譜法在紫外光區252-253nm測定甲磺酸酯的衍生化產物，從而實現對含甲磺酸的原料藥中甲磺酸酯的定性與定量檢測。

本發明所述的衍生化HPLC-UV法測定甲磺酸酯的方法，具體包括以下步驟：

(1)用氫氧化鈉調節反應體系pH到7-8，在80-100℃條件下，使用2-萘硫酚衍生化試劑對甲磺酸酯衍生化反應生成在紫外光區252-253nm有較強的吸收的衍生化產物；