本發明公開了一種從烏藥中分離去甲異波爾定的方法，經過制備烏藥粗提取液、初步純化和分離純化烏藥粗提取物，得到去甲異波爾定；本發明合理的利用高速逆流色譜技術，可以實現高效率、簡便、快捷從烏藥中提取得到去甲異波爾定的效果；并且提取得到的去甲異波爾定的純度高；同時本發明提供的技術方案提取效率高，提取過程去甲異波爾定的損耗率低，具有優異的發展前景。

技術領域

本發明涉及天然產物活性成分的分離純化技術領域，具體為一種從烏藥中分離去甲異波爾定的方法。

背景技術

烏藥為樟科山胡椒屬植物烏藥(Lindera aggregata(Sims)Kos-term.)的干燥塊根，主產于浙江、湖南、廣東、安徽等地，是一種重要的常用中藥材。烏藥具有治療風濕痛、經痛、改善中樞神經系統、鎮痛、抗炎以及胃腸道雙向調節作用，既能促使胃腸蠕動，又能緩解胃腸道平滑肌痙攣，還可以改善功能性胃腸病患者泛酸、噯氣、食欲不振、腹脹、腹痛、腹瀉便秘等臨床癥狀。研究表明，烏藥中化學成分主要有倍半萜及內酯、異喹啉生物堿等，其中異喹啉類生物堿具有廣泛的生理活性，具有抗菌、抗腫瘤、鎮痛、抗心律失常、抗血小板聚集、降壓、調節免疫等功能，同時副作用較小，具有很高的開發利用價值。去甲異波爾定是烏藥中的主要異喹啉生物堿，不僅具有體外抗氧化作用(藥學學報200641(10)：956～962)，還可用于治療自身免疫性疾病，如：多肌炎、慢性活動性肝炎、混合性結締組織病、原發性膽汁性肝硬變、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性噬中性白細胞減少癥、狼瘡性腎炎、慢性萎縮性胃炎、自身免疫性不育、子宮內膜異位癥等疾病，在臨床上具有重要應用價值。

但是，現有技術中并沒有公開一種從烏藥中快速、高效、穩定地提取去甲異波爾定的方法。而高速逆流色譜法是一種近年來快速發展的、連續高效的液液分配色譜技術，已在生物、醫藥、食品、材料等領域得到廣泛的應用，尤其是在天然產物活性成分的分離純化領域倍受重視。

因此，提供一種利用高速逆流色譜分離烏藥中去甲異波爾定的方法，是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種利用高速逆流色譜分離烏藥中去甲異波爾定的方法，以實現高效率、簡便、快速的從烏藥中分離去甲異波爾定的技術效果。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種分離烏藥中去甲異波爾定的方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)制備烏藥粗提取液：將烏藥經過蒸餾水浸泡、浸提、過濾和離心分離過程，得到烏藥粗提取液；

(2)初步純化：利用大孔吸附樹脂柱，依次使用蒸餾水和質量濃度為70％的乙醇對上述制備得到的烏藥粗提取液進行洗脫，得到的乙醇洗脫液經過濃縮、冷凍干燥后得到烏藥粗提取物；

(3)分離純化烏藥粗提取物：利用高速逆流色譜對上述烏藥粗提取物進行分離提純，得到去甲異波爾定。

優選的，所述步驟(1)具體包括如下步驟：

(a)稱取烏藥原料，并稱取3～5倍質量的蒸餾水；將烏藥加入到蒸餾水中浸泡過夜；

(b)然后在70～100℃水浴條件下浸提30～60min，并適時攪拌，接著進行過濾分別得到濾液和濾渣；

(c)向上述得到的濾渣中加入3倍質量的蒸餾水，并重復上述步驟(b)；

(d)合并步驟(b)和步驟(c)得到的濾液，經過離心分離，得到上清液即為烏藥粗提取液。

優選的，所述步驟(2)具體包括如下步驟：

(A)先量取500mLAB-8大孔吸附樹脂用95％乙醇浸泡12～24h，裝柱；然后使用蒸餾水對上述大孔吸附樹脂柱進行洗滌至流出液無醇味；