本發明公開了一種同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，采用直接競爭法反應原理，將多種喹諾酮類藥物的單克隆抗體以微陣列形式固定于微孔板底部，制備成微孔板生物芯片陣列，并依次與喹諾酮類納米材料標記的混合人工抗原、喹諾酮類藥物標準品反應，最后用銀增強顯色，并采用可視化芯片掃描儀對微孔板顯色結果進行快速掃描成像，圖像采用芯片分析軟件處理。本發明方法極大地減短了檢測時間，提高了靈敏度，實驗操作簡單；對于喹諾酮類9種抗生素可同時分別檢測，提高了檢測效率，對喹諾酮類多項藥物殘留分析方法研究具有重要意義，具有很好的應用推廣價值，為食品中氟喹諾酮類的殘留檢測提供一定的參考。

技術領域

本發明屬于藥物殘留檢測技術，特別是涉及一種同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法。

背景技術

喹諾酮類藥物(Fluoroquinolones,FQs)是一類具有6-氟-7-哌嗪-4-諾酮環結構(母核結構)的抗菌藥物。喹諾酮類藥物是近年發展起來的一類廣譜抗菌藥，也是近幾年來世界各國競相開發與應用的新品種，到目前為止已經有多種藥物在市場上投放。為了控制和治療動物疾病，養殖和治療動物過程中會有多種喹諾酮類藥物同時或交替使用的情況，這就導致了藥物多殘留的發生。動物性食品中的喹諾酮類藥物殘留超標對人體存在潛在的威脅，這類獸藥殘留問題越來越被人們關注。

人們長期食用喹諾酮類藥物殘留超標的食物可能引起人體的腸胃不適，易造成腹痛，腹瀉以及嘔吐；還有可能引起中樞系統的不良反應如抽搐、頭暈甚至可能會引起癲癇。美國食品藥品管理局強調喹諾酮類抗生素會對神經造成永久性的損傷。喹諾酮類藥物可能影響兒童的軟骨發育并引起皮膚光毒性反應如蕁麻疹、紅斑及皮膚潮紅伴隨瘙癢，甚至存在致畸、致癌、致突變的作用。喹諾酮類藥物全身性損害主要表現為過敏性反應和過敏性休克，其他包括發熱、寒戰、多汗、乏力、水腫等。其中，過敏性休克主要為速發型變態反應，多數經治療或搶救后治愈，也有少數患者死亡。喹諾酮類藥物對泌尿系統損害主要表現為腎功能損害，包括尿頻、少尿、結晶尿、尿液混濁、蛋白尿等。

目前，多個國家和機構規定了喹諾酮類藥物的使用標準以及其最高殘留限量。日本規定了喹諾酮類藥物最大允許殘留量為10～100μg/kg，而我國規定中不同品種喹諾酮類藥物的最大殘留量在30～500μg/kg之間。雞、牛、羊、兔、豬等動物的脂肪、肌肉、肝、腎食品中諾氟沙星、培氟沙星等喹諾酮類獸藥最高殘留限量10～1900μg/kg。

氟喹諾酮類藥物的國內外殘留研究方法主要有微生物檢測法、色譜法、免疫分析法。其中色譜法包括高效液相色譜法(HPLC)、液-質聯用分析法(LC/MC)、高效液相色譜-熒光法(HP)LC/FL、高效薄層色譜法(HPTLC)等，免疫分析檢測法包括酶聯免疫吸附法(ELISA)、膠體金試紙條法、蛋白芯片法等。微生物法的優點是操作簡便、成本低、檢測快速，但該法的檢測限量高于各國所規定的最低檢測限量；靈敏度不高，特異性差。色譜法雖然檢測結果精確，但是存在技術操作復雜、檢測時間長、前處理繁鎖、設備昂貴、及費用高等缺點，所以其不適于大規模的現場快速檢測。免疫法中酶聯免疫吸附(ELISA)測定及膠體金試紙條技術作為一種方便、低成本、快速、高通量的篩選手段，廣泛應用于眾多領域，但是ELISA只能檢測單組分殘留，而膠體金試紙條技術容易出現高的假陽性率或假陰性率。蛋白芯片法具有特異性強，反應十分靈敏，對于大量樣品的快速檢測，具有檢測多組分殘留、特異性高、操作簡單、高通量、檢測時間很短、成本低等優點，在國內外的研究中被廣泛應用于食品監測、臨床監測、病毒監測等領域，我們有理由相信，隨著科技的迅猛發展，免疫分析將最有可能取代色譜儀器分析成為此類藥物最常用的方法。

發明內容

發明目的：針對現有技術存在的上述問題，本發明提供了一種利用可視化蛋白芯片分析技術對待測樣品中多種喹諾酮類抗生素多殘留含量的同時檢測方法。

技術方案：本發明所述的一種同時檢測喹諾酮類抗生素殘留量的方法，包括以下步驟：